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【摘要】目的：建立三拗鱼龙合剂中橙皮苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定，色谱柱为碳十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相为乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：10ml/min；柱温：30℃。结果：橙皮苷在1391～2226μg/ml范围呈良好的线性关系，平均回收率10011%，RSD=137%（n=6）。结论：该方法简单、准确，重复性、稳定性良好，精密度高，结果可靠，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。
【关键词】三拗鱼龙合剂；橙皮苷；HPLC
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）01-0044-02
三拗鱼龙合剂由鱼腥草、浙贝母、陈皮等药味组成，为太和县中医院医院制剂。具有宣肺平喘、止咳消痰的功效，用于急、慢性支气管炎。作为医院制剂，原标准中无含量测定项。为了更好的控制医院制剂的质量，使本制剂疗效稳定可控，本文采用高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷的含量，该法灵敏度高，专属性好，操作简单，重复性好，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。
1仪器与材料
11仪器安捷伦LC-1220型高效液相色谱仪；紫外检测器；101-1A型数显恒温干燥箱（上海光地仪器设备有限公司）；AL-120型电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器公司）；HS-180型超声波清洗机（宁波海曙金兰教仪科研究所）。
12试药三拗鱼龙合剂（批号：20140417、20140712、20140906，太和中医院中药制剂室）；橙皮苷对照品（批号：110721-201316，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
21色谱条件色谱柱：依利特Hypersil ODS（46mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：10ml/min；柱温：30℃；进样量：20μl。理论塔板数以橙皮苷计应不低于4000，分离度大于15。
22对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇-04%磷酸水溶液（1∶1）制成每1ml含50μg的溶液。
23供试品溶液的制备[1]密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理（功率100W，频率40kHz）20min，放冷，用甲醇定容，摇匀，离心（3000r/min，10min），精密移取上清液5ml置10ml量瓶中，用04%磷酸稀释至刻度，摇匀，过045μm滤膜，即得。
24干扰试验按处方比例及生产工艺制备不含陈皮的三拗鱼龙合剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果表明，阴性对照溶液在与橙皮苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。
25线性关系考察精密称取橙皮苷对照品1113mg，置25ml量瓶中，用甲醇定容，作为储备液。精密移取储备液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇-04%磷酸溶液（1∶1）稀释至刻度，摇匀，作为2号对照品溶液；同法制成3、4、5号对照品溶液。分别精密吸取各对照品溶液20μl，按上述色谱条件进样。以对照品的进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程：Y=1945×10-9X-0002225532，R=09996。结果表明，橙皮苷在1391～2226μg/ml范围内线性关系良好。
26精密度试验取“25”项下3号对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果橙皮苷峰面积RSD为092%。 结果表明仪器精密度良好。
3结果与讨论
31流动相的选择HPLC法测定橙皮苷含量的文献[4-7]较多，常采用甲醇-水系统和乙腈-水系统。由于峰形较差，常会在流动相中添加一定比例酸改善峰形。试验考察了甲醇-04%醋酸水溶液（35∶65）、甲醇-04%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）等流动相，发现乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）峰形较为满意，且保留时间适宜、分离度良好，故选择此条件作为测定条件。
32样品处理分别对样品超声10、15、20、25min后进样考察，结果显示超声20min含量高于15min，而超声25min被测组分含量几乎不再增加，故确定超声时间20min即可。由于定容后样品过滤较困难，试验时间长，故选择离心法除去杂质。且离心后与直接过滤样品的色谱峰面积相比较，无明显差异。样品用甲醇处理后直接进样，色谱峰前沿明显，分离度差。用04%磷酸稀释后进样，峰形较为满意。故样品处理后，故加入适量磷酸以调整峰形。
采用HPLC法测定三拗鱼龙合剂的含量，操作简便，结果准确可靠，重现性好，可用于该品种的质量控制和稳定性考察，为三拗鱼龙合剂质量标准的建立提供依据。
参考文献
[1]龙荣，祝文兵，彭芳玲，等.RP-HPLC法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量[J].儿科药学杂志，2008，14（2）：37-38.
[2]姜志戎.HPLC法测定和胃合剂中橙皮苷的含量[J].中医药临床杂志，2011，23（10）：903-904.
[3]张颖，蒋俊春，孟建升.HPLC法测定公英健胃合剂中橙皮苷的含量[J].光明中医，2009，24（4）：654-655.
[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：176 -177.
[5]孙冬梅，毕晓黎，胥爱丽，等.HPLC法测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2009，15（11）：1-3.
[6]焦志峰，迟栋.HPLC法测定香砂六君合剂中橙皮苷的含量[J].光明中医，2011，26（4）：695-696.
[7]仇雅静，朱梓文.HPLC法测定通肠理气合剂中芍药苷和橙皮苷的含量[J].中国药事，2012，26（12）：1366-1368.
（收稿日期：20141012）
【关键词】三拗鱼龙合剂；橙皮苷；HPLC
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2015）01-0044-02
三拗鱼龙合剂由鱼腥草、浙贝母、陈皮等药味组成，为太和县中医院医院制剂。具有宣肺平喘、止咳消痰的功效，用于急、慢性支气管炎。作为医院制剂，原标准中无含量测定项。为了更好的控制医院制剂的质量，使本制剂疗效稳定可控，本文采用高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷的含量，该法灵敏度高，专属性好，操作简单，重复性好，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。
1仪器与材料
11仪器安捷伦LC-1220型高效液相色谱仪；紫外检测器；101-1A型数显恒温干燥箱（上海光地仪器设备有限公司）；AL-120型电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器公司）；HS-180型超声波清洗机（宁波海曙金兰教仪科研究所）。
12试药三拗鱼龙合剂（批号：20140417、20140712、20140906，太和中医院中药制剂室）；橙皮苷对照品（批号：110721-201316，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。
2方法与结果
21色谱条件色谱柱：依利特Hypersil ODS（46mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：10ml/min；柱温：30℃；进样量：20μl。理论塔板数以橙皮苷计应不低于4000，分离度大于15。
22对照品溶液的制备精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇-04%磷酸水溶液（1∶1）制成每1ml含50μg的溶液。
23供试品溶液的制备[1]密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理（功率100W，频率40kHz）20min，放冷，用甲醇定容，摇匀，离心（3000r/min，10min），精密移取上清液5ml置10ml量瓶中，用04%磷酸稀释至刻度，摇匀，过045μm滤膜，即得。
24干扰试验按处方比例及生产工艺制备不含陈皮的三拗鱼龙合剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果表明，阴性对照溶液在与橙皮苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。
25线性关系考察精密称取橙皮苷对照品1113mg，置25ml量瓶中，用甲醇定容，作为储备液。精密移取储备液5ml，置10ml量瓶中，用甲醇-04%磷酸溶液（1∶1）稀释至刻度，摇匀，作为2号对照品溶液；同法制成3、4、5号对照品溶液。分别精密吸取各对照品溶液20μl，按上述色谱条件进样。以对照品的进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程：Y=1945×10-9X-0002225532，R=09996。结果表明，橙皮苷在1391～2226μg/ml范围内线性关系良好。
26精密度试验取“25”项下3号对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果橙皮苷峰面积RSD为092%。 结果表明仪器精密度良好。
3结果与讨论
31流动相的选择HPLC法测定橙皮苷含量的文献[4-7]较多，常采用甲醇-水系统和乙腈-水系统。由于峰形较差，常会在流动相中添加一定比例酸改善峰形。试验考察了甲醇-04%醋酸水溶液（35∶65）、甲醇-04%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）等流动相，发现乙腈-04%磷酸水溶液（20∶80）峰形较为满意，且保留时间适宜、分离度良好，故选择此条件作为测定条件。
32样品处理分别对样品超声10、15、20、25min后进样考察，结果显示超声20min含量高于15min，而超声25min被测组分含量几乎不再增加，故确定超声时间20min即可。由于定容后样品过滤较困难，试验时间长，故选择离心法除去杂质。且离心后与直接过滤样品的色谱峰面积相比较，无明显差异。样品用甲醇处理后直接进样，色谱峰前沿明显，分离度差。用04%磷酸稀释后进样，峰形较为满意。故样品处理后，故加入适量磷酸以调整峰形。
采用HPLC法测定三拗鱼龙合剂的含量，操作简便，结果准确可靠，重现性好，可用于该品种的质量控制和稳定性考察，为三拗鱼龙合剂质量标准的建立提供依据。
参考文献
[1]龙荣，祝文兵，彭芳玲，等.RP-HPLC法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量[J].儿科药学杂志，2008，14（2）：37-38.
[2]姜志戎.HPLC法测定和胃合剂中橙皮苷的含量[J].中医药临床杂志，2011，23（10）：903-904.
[3]张颖，蒋俊春，孟建升.HPLC法测定公英健胃合剂中橙皮苷的含量[J].光明中医，2009，24（4）：654-655.
[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：176 -177.
[5]孙冬梅，毕晓黎，胥爱丽，等.HPLC法测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量[J].中国实验方剂学杂志，2009，15（11）：1-3.
[6]焦志峰，迟栋.HPLC法测定香砂六君合剂中橙皮苷的含量[J].光明中医，2011，26（4）：695-696.
[7]仇雅静，朱梓文.HPLC法测定通肠理气合剂中芍药苷和橙皮苷的含量[J].中国药事，2012，26（12）：1366-1368.
（收稿日期：20141012）