【摘 要】
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用里氏木霉(Trichoderma reesei)作为宿主同源表达内切葡聚糖酶基因。运用聚合酶链反应(PCR)技术从里氏木霉c DNA中扩增得到内切葡聚糖酶基因cel7b序列,并将其连接到载体p18-
【基金项目】
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江西省科研院所基础设施配套项目(20142BBA13030);江西省科学院科研开发专项基金(2014-YYB-01);江西省科学院协同创新专项资金普惠一类项目(2013-XTPH-29)
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用里氏木霉(Trichoderma reesei)作为宿主同源表达内切葡聚糖酶基因。运用聚合酶链反应(PCR)技术从里氏木霉c DNA中扩增得到内切葡聚糖酶基因cel7b序列,并将其连接到载体p18-m2上构建重组质粒,将重组质粒转化到里氏木霉菌株中,通过筛选获得表达内切葡聚糖酶的重组里氏木霉工程菌。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测显示,发酵液中重组内切葡聚糖酶的分子质量约48 ku。摇瓶发酵结果显示,内切葡聚糖酶在重组里氏木霉中得到分泌表达,发酵液中的内切葡聚糖酶和滤纸酶活分别达到了726 U/mL和28.7 U/mL,分别为出发菌株酶活的2.9倍和1.1倍。玉米芯进行糖化试验结果显示,重组里氏木霉所产酶液糖化玉米芯的酶解得率为81.4%,比出发菌株提高了6.3%。
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