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摘 要：本文建立了一种特殊医学用途配方食品中维生素C含量测定的方法。经实验测定，质控样的维生素C含量理论值与测定值在允许误差范围内，分别为96.05 mg/100 g与99.31 mg/100 g，质控样和样本的加标回收率均较好，该实验方法准确度较高，且精密度良好，6个批次的特殊医学用途配方食品中维生素C的含量均满足相关的要求，本方法适用于检测该类产品中维生素C的含量。
关键词：维生素C;荧光法;特殊医学用途配方食品
维生素C是一种水溶性维生素，是人体必需的营养素之一，在维持正常的人体机能方面有着重要的作用。它参与了神经介质、激素的生物合成，促进胶原蛋白的合成，具有抗癌的功效。在促进胆固醇排泄防止其在动脉内壁沉积方面也有重要的作用。维生素C广泛存在于植物组织中，新鲜的水果和蔬菜中含量较为丰富，尤其是花菜、青辣椒、橙子、猕猴桃等果蔬。人体缺乏维生素C会引起相关疾病，但其摄入量只需满足机体正常需求即可，无需过量摄入。人体自身无法合成维生素C，只能从食物或肠外营养供给，但其容易氧化，且在体内储存时间短。一些特殊的人群，如孕产妇，除正常的饮食摄取以外，可适当补充一些添加维生素C的特殊营养物质。
研究建立快速准确测定特殊配方食品中维生素C含量的方法具有重要意义，可为保障生命体健康和安全提供有力的技术支撑。对于维生素C的检测方法研究较多，有高效液相色谱法[1-2]、紫外分光光度法[3]、荧光比色法[4-5]及光学快速检测卡法[6]等。《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》（GB 5413.18—2010）[4]中的荧光法，是目前检验机构和乳粉企业普遍采用的方法，该方法具有操作简便高效、重复性好、灵敏度高、检出限低和线性关系好等优点。本研究拟采用质控样品、精密度实验、加标实验和实际样本测试等方法研究荧光法用于检测特殊医学用途配方食品中（孕产妇营养补充剂）维生素C含量的适用性。
1 材料与方法
1.1 样本与试剂
不同批次的孕产妇营养配方谷粉（2个不同厂家各3批次），总计6个样本，均由企业提供。本实验方法中所涉及到的常规试剂除活性炭（化学纯）外均为分析纯，质控样购买于中国检验检疫科学研究院测试评价中心。
1.2 仪器与设备
温度可调节的烘箱;培养箱;ATL-224电子天平;RF-6000荧光分光光度计。
1.3 样本的前处理与标准溶液的配制
样本的前处理过程和维生素C标准溶液（浓度0.1 mg/mL）
的配制方法参照国家标准《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》（GB 5413.18—2010）中的方法进行。
1.4 方法
1.4.1 样本的测定
样本的测定中，用样本溶液荧光值减去样本空白溶液荧光值后，可在标准曲线上查找对应的维生素C的质量浓度。
1.4.2 待测液的制备
按照GB 5413.18—2010中的方法绘制标准曲线，试剂添加量按表1进行，分别移取不同体积的标准溶液于10 mL试管中，1到4编号备用，用蒸馏水补充至2 mL，同时吸取2 mL空白溶液于另一个10 mL试管中，标记为5号。定容到2 mL后继续添加邻苯二胺溶液，摇匀，在避光条件下静置1 h后待测。
1.4.3 加标回收率实验
在相同的实验操作下，将质控样与6个样本进行测定，得到其维生素C的含量。质控样的维生素C含量测定后，与该理论值进行比较，对实验结果的可靠性进行验证。加标回收实验：对已测得维生素C含量的样本，加入一定量的维生素C标准溶液（其质量浓度为0.1 mg/mL）。测定样本、加标样本、质控样和加标质控样，对实验测定结果进行比对，考察回收率的情况。
1.4.4 精密度实验
3号孕妇配方谷粉为精密度测试实验的研究对象。分别称取3号样本6份，在相同的实验条件下，平行测定6份产品中的维生素C含量，研究本实验方法的精密度情况。
1.4.5 数据处理
采用常用软件Excel软件进行数据分析处理。
2 结果与分析
2.1 样本测定结果
取质控样品和6个不同批次的样本2.5 g，同一种样品均取平行样，分别测定维生素C含量，结果见表2（该方法的检出限为0.1 mg/100 g）。
2.2 标准曲线的绘制
参照国家标准GB 5413.18—2010中维生素C的测定方法，将荧光分光光度计激发波长设定为350 nm，发射波长为430 nm，测定标准系列溶液的荧光值，标准曲线的横坐标为维生素C标准溶液的质量浓度（μg/mL），标准曲线的纵坐标为相应的净荧光值（标准系列荧光值减去标准空白荧光值），绘制标准曲线图（图1），所拟合的标准曲线线性方程为y=10.921 3x+0.630 3（R2=0.999 2），线性良好。
2.3 加标回收验证实验结果
在表3中，前4组数据是3号样本的加标回收实验，最后一组是质控样本（样品质量为2.500 6 g）的加标回收实验。由表3可知，特殊医学用途配方食品样本和质控样的加标回收率均较高，样本的回收率结果为90.0%～93.5%，质控样为92.5%，相对标准偏差为1.25%，值相对较小。荧光法适合检测特殊医学用途配方食品中的维生素C含量，且本方法可靠性高，具有较好的准确度。
2.4 精密度实验结果
由表4可知，对3号样本测定6次平行实验，维生素C含量平均值为155.1 mg/100 g，相对标准偏差为4.64%，在国标规定的范围内，表明该方法的精密度较好，可以满足检测要求。
3 结论
本研究中质控样维生素C含量理论值与测定值在允许误差范围内，证明测定结果是可靠的。质控样和3号样本的加标回收率为90.0%～93.5%，相对标准偏差为4.64%，表明荧光法准确度较高，精密度较好，测定结果准确、可信。6批次市售的特殊医学用途配方食品中维生素C含量均符合国家标准中对维生素C含量添加量的要求，表明荧光法适合检测特殊医学用途配方食品中的维生素C含量，具有实际参考
价值。
参考文献
[1]林桂荣，郭泳，付亚文，等.新鲜果蔬维生素C测定方法研究[J].北方园艺，1995（2）：7-9.
[2]闫龙宝，刘艳琴，王浩，等.HPLC法测定婴幼儿配方奶粉中维生素C[J].食品科技，2008，32（6）：184-185.
[3]张英.食品理化检测与微生物实验[M].北京：中国轻工业出版社，2004.
[4]中华人民共和国卫生部.食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定：GB 5413.18—2010[S].北京：中國标准出版社，2010.
[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.肉制品 维生素C含量测定：GB/T 9695.29—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.
[6]左春艳，何保山，王丹等.维生素C光学快速检测卡研究[J].食品科技，2012，37（4）：281-282.
关键词：维生素C;荧光法;特殊医学用途配方食品
维生素C是一种水溶性维生素，是人体必需的营养素之一，在维持正常的人体机能方面有着重要的作用。它参与了神经介质、激素的生物合成，促进胶原蛋白的合成，具有抗癌的功效。在促进胆固醇排泄防止其在动脉内壁沉积方面也有重要的作用。维生素C广泛存在于植物组织中，新鲜的水果和蔬菜中含量较为丰富，尤其是花菜、青辣椒、橙子、猕猴桃等果蔬。人体缺乏维生素C会引起相关疾病，但其摄入量只需满足机体正常需求即可，无需过量摄入。人体自身无法合成维生素C，只能从食物或肠外营养供给，但其容易氧化，且在体内储存时间短。一些特殊的人群，如孕产妇，除正常的饮食摄取以外，可适当补充一些添加维生素C的特殊营养物质。
研究建立快速准确测定特殊配方食品中维生素C含量的方法具有重要意义，可为保障生命体健康和安全提供有力的技术支撑。对于维生素C的检测方法研究较多，有高效液相色谱法[1-2]、紫外分光光度法[3]、荧光比色法[4-5]及光学快速检测卡法[6]等。《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》（GB 5413.18—2010）[4]中的荧光法，是目前检验机构和乳粉企业普遍采用的方法，该方法具有操作简便高效、重复性好、灵敏度高、检出限低和线性关系好等优点。本研究拟采用质控样品、精密度实验、加标实验和实际样本测试等方法研究荧光法用于检测特殊医学用途配方食品中（孕产妇营养补充剂）维生素C含量的适用性。
1 材料与方法
1.1 样本与试剂
不同批次的孕产妇营养配方谷粉（2个不同厂家各3批次），总计6个样本，均由企业提供。本实验方法中所涉及到的常规试剂除活性炭（化学纯）外均为分析纯，质控样购买于中国检验检疫科学研究院测试评价中心。
1.2 仪器与设备
温度可调节的烘箱;培养箱;ATL-224电子天平;RF-6000荧光分光光度计。
1.3 样本的前处理与标准溶液的配制
样本的前处理过程和维生素C标准溶液（浓度0.1 mg/mL）
的配制方法参照国家标准《食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定》（GB 5413.18—2010）中的方法进行。
1.4 方法
1.4.1 样本的测定
样本的测定中，用样本溶液荧光值减去样本空白溶液荧光值后，可在标准曲线上查找对应的维生素C的质量浓度。
1.4.2 待测液的制备
按照GB 5413.18—2010中的方法绘制标准曲线，试剂添加量按表1进行，分别移取不同体积的标准溶液于10 mL试管中，1到4编号备用，用蒸馏水补充至2 mL，同时吸取2 mL空白溶液于另一个10 mL试管中，标记为5号。定容到2 mL后继续添加邻苯二胺溶液，摇匀，在避光条件下静置1 h后待测。
1.4.3 加标回收率实验
在相同的实验操作下，将质控样与6个样本进行测定，得到其维生素C的含量。质控样的维生素C含量测定后，与该理论值进行比较，对实验结果的可靠性进行验证。加标回收实验：对已测得维生素C含量的样本，加入一定量的维生素C标准溶液（其质量浓度为0.1 mg/mL）。测定样本、加标样本、质控样和加标质控样，对实验测定结果进行比对，考察回收率的情况。
1.4.4 精密度实验
3号孕妇配方谷粉为精密度测试实验的研究对象。分别称取3号样本6份，在相同的实验条件下，平行测定6份产品中的维生素C含量，研究本实验方法的精密度情况。
1.4.5 数据处理
采用常用软件Excel软件进行数据分析处理。
2 结果与分析
2.1 样本测定结果
取质控样品和6个不同批次的样本2.5 g，同一种样品均取平行样，分别测定维生素C含量，结果见表2（该方法的检出限为0.1 mg/100 g）。
2.2 标准曲线的绘制
参照国家标准GB 5413.18—2010中维生素C的测定方法，将荧光分光光度计激发波长设定为350 nm，发射波长为430 nm，测定标准系列溶液的荧光值，标准曲线的横坐标为维生素C标准溶液的质量浓度（μg/mL），标准曲线的纵坐标为相应的净荧光值（标准系列荧光值减去标准空白荧光值），绘制标准曲线图（图1），所拟合的标准曲线线性方程为y=10.921 3x+0.630 3（R2=0.999 2），线性良好。
2.3 加标回收验证实验结果
在表3中，前4组数据是3号样本的加标回收实验，最后一组是质控样本（样品质量为2.500 6 g）的加标回收实验。由表3可知，特殊医学用途配方食品样本和质控样的加标回收率均较高，样本的回收率结果为90.0%～93.5%，质控样为92.5%，相对标准偏差为1.25%，值相对较小。荧光法适合检测特殊医学用途配方食品中的维生素C含量，且本方法可靠性高，具有较好的准确度。
2.4 精密度实验结果
由表4可知，对3号样本测定6次平行实验，维生素C含量平均值为155.1 mg/100 g，相对标准偏差为4.64%，在国标规定的范围内，表明该方法的精密度较好，可以满足检测要求。
3 结论
本研究中质控样维生素C含量理论值与测定值在允许误差范围内，证明测定结果是可靠的。质控样和3号样本的加标回收率为90.0%～93.5%，相对标准偏差为4.64%，表明荧光法准确度较高，精密度较好，测定结果准确、可信。6批次市售的特殊医学用途配方食品中维生素C含量均符合国家标准中对维生素C含量添加量的要求，表明荧光法适合检测特殊医学用途配方食品中的维生素C含量，具有实际参考
价值。
参考文献
[1]林桂荣，郭泳，付亚文，等.新鲜果蔬维生素C测定方法研究[J].北方园艺，1995（2）：7-9.
[2]闫龙宝，刘艳琴，王浩，等.HPLC法测定婴幼儿配方奶粉中维生素C[J].食品科技，2008，32（6）：184-185.
[3]张英.食品理化检测与微生物实验[M].北京：中国轻工业出版社，2004.
[4]中华人民共和国卫生部.食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中维生素C的测定：GB 5413.18—2010[S].北京：中國标准出版社，2010.
[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.肉制品 维生素C含量测定：GB/T 9695.29—2008[S].北京：中国标准出版社，2008.
[6]左春艳，何保山，王丹等.维生素C光学快速检测卡研究[J].食品科技，2012，37（4）：281-282.