【摘 要】
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目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)对纤维软骨细胞外基质分泌、VEGF表达及促进半月板无血管区的损伤修复中的作用。方法:将新西兰大白兔半月板白区,经胶原酶消化、离心分离后,
【机 构】
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解放军305医院骨科,解放军总医院骨科,首都师范大学化学系
【基金项目】
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全军医学科技“十二五”科研项目(编号:CWS11C290);国家自然科学基金青年基金(编号:00912210010006);国家高技术研究发展计划(863计划)(编号:2006AA02A136)~~
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目的:探讨结缔组织生长因子(CTGF)对纤维软骨细胞外基质分泌、VEGF表达及促进半月板无血管区的损伤修复中的作用。方法:将新西兰大白兔半月板白区,经胶原酶消化、离心分离后,提取半月板纤维软骨细胞,培养至第2代。用流式细胞仪鉴定该细胞表面CD31,CD44,CD45和CD105标志物,并用Ⅱ型胶原抗体做免疫细胞化学鉴定,以证明所培养、传代的细胞是纤维软骨细胞。分别将细胞培养在浓度100ng/ml的CTGF培养基中3、14d后,通过实时定量聚合酶链反应,检测Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原和VEGF基因的表达变化情况。造模,在兔半月板中央区,制作长3mm的纵行撕裂。将45只大白兔随机分为3组,处理方式为:半月板单纯缝合术,缝合术加填充PBS-纤维蛋白胶,缝合术加填充1.5μgCTGF-纤维蛋白胶。术后第1、4、10周用荧光免疫组织化学分析法显示Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGF在损伤处的表达与分布情况,直观撕裂处的愈合情况。结果:体外实验第14天,定量RT-PCR结果显示,100ng/mlCTGF组中的Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGFmRNA表达比PBS对照组,明显增加。体内实验的荧光免疫组织化学结果显示,在术后第10周,CTGF治疗组中的Ⅰ型、Ⅱ型胶原和VEGF已完全填充撕裂损伤处。PBS-蛋白胶组中,损伤处仍有明显裂隙。结论:CTGF可促进半月板无血管区重要的细胞外基质(Ⅰ型、Ⅱ型胶原)的合成,同时损伤处VEGF的表达活性明显增强,有利于促进无血管区半月板撕裂损伤的愈合。
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