【摘 要】
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目的:构建COX-2 siRNA特异性表达载体,观察其对HuH-7细胞中COX-2表达及产生PGE2的影响.方法:基于人COX-2基因核苷酸序列,软件分析并选择两靶序列,设计合成发夹结构形成单位,
【机 构】
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第四军医大学西京医院肝胆外科,解放军白求恩国际和平医院肝胆外科,解放军白求恩国际和平医院干部病房
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目的:构建COX-2 siRNA特异性表达载体,观察其对HuH-7细胞中COX-2表达及产生PGE2的影响.方法:基于人COX-2基因核苷酸序列,软件分析并选择两靶序列,设计合成发夹结构形成单位,然后将其克隆入pSIREN-Shuttle载体.重组质粒用于瞬时或稳定转染HuH-7细胞,RT-PCR、Western blot用于检测Cox-2的表达,并测定转染前后PEG2的浓度.结果:合成的COX-2 siRNA表达载体瞬时转染HuH-7细胞后在mRNA及蛋白水平明显抑制COX-2的表达,稳定转染后则完全阻抑Cox-2的表达,并能抑制PEG2的生成.结论:构建的Cox-2 siRNA表达载体具有高效的基因抑制效率,为研究COX-2基因功能及基因治疗提供良好的工具及手段.
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