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【摘要】对HIV抗体的检测是目前最常用的诊断艾滋病的方法。为此，本文详细阐述了HIV抗体筛查和确认过程中可以采用的各种试验方法。
【关键字】 HIV抗体 艾滋病 试验
引言
为了做好艾滋病的控制和预防工作，我们必须正确地对HIV病毒的感染作出诊断，在传染源上做好控制工作。目前检测人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体是最常用的诊断艾滋病的方法，这种方法不但特异性、敏感性高，方法简单方便，最重要的原因是HIV抗体在HIV病毒感染后除了早期很短的“窗口期”外的整个生命周期内能够稳定的存在并可以被检测到。而本文着重讨论HIV抗体的检测方法，包括HIV抗体的筛查试验和HIV抗体的确认试验两部分。
1 HIV抗体的筛查试验
检测原理可以分为酶联免疫吸附法、免疫层析法和颗粒凝聚法。
1.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）
酶联免疫吸附方法又称作酶标免疫分析方法（EIA），是美国食品和医药管理署（FDA）批准的艾滋病毒检查方法。自1985年第一代ELISA试剂诞生以来，随着医药技术和生物技术快速发展，ELISA已经发展到第三代的双抗原夹心法和第四代的抗原抗体联合检测法。目前已经应用的ELISA法有8种，国内使用最广泛的是第三代双抗原夹心法试剂，几乎不用第一代和第二代试剂。国际上有一些国家已经将第四代的ELISA试剂对血源进行筛查，该方法和第三代HIV-1/2试剂相比，检出结果时间要提前4-9天。
酶联免疫吸试验适用于对大批量的标本进行检测，是各大、中、小型医院和各级疾控机构筛查HIV抗体的主要技术方法。其基本原理是先将需要检测的抗体或抗原固定在固体载体的表面，然后将用酶标记后的抗体或抗原和被固定的住的相应的抗体和或抗原发生反应，加底物显色并用酶标仪测定检验结果。该方法可使用尿液、血液和唾液样品。
1.2 快速诊断试验
快速诊断试验具有简便、快捷、不要求特殊设备等优点，适用于基层和应急应用，其最大的缺点在于价格过高，特异性和敏感性低于ELISA，不适用于市内的血液筛选。快速诊断采用的基本原理有三种，即免疫层析、免疫斑点和乳胶凝集。目前在我国批准上市的有金标快速诊断试剂和Abbott生产的Determine试剂。金标法可以适用于初筛检测，凡是鉴定为阳性的人，需要用另外一种方法如ELISA或者蛋白印记法进行确定。而determine分为全血法和血清法两种，其中全血法效果更佳。除了这两种方法以外，还有尿液HIV检测法、唾液HIV检测法和家庭HIV检测法。尿液检验法敏感度较好，但是特异性较差，如果尿液被检测为阳性，还需做其他的检查。由美国食品和医药管理署（FDA）批准的Orasure唾液试剂特异性和敏感性均较高，适用于进行筛查。
1.3 免疫荧光试验
该方法作为HIV检验的补充方法于1992年获得FDA批准，具有较高的敏感性和特异性。运用免疫荧光试验测定HIV病毒抗体时一般选用的是间接方法，将HIV抗原和待检测的血清发生作用后，同有荧光标记的生物素抗人IgG结合。这种方法的优点是使用具有荧光标记的生物素抗人IgG可以检测发生于人体上的多个具有不同特异性反应，具有普遍适用性。该方法既可以检测抗体，又可以联合检测抗体抗原。有效试验的阳性、阴性对照必须符合试剂盒的规定。
2 HIV抗体的确认试验
确认试验主要包括免疫印迹试验（WB）、免疫荧光试验（IFA）、条带免疫试验（LIATEK HIVIII）和放射免疫沉淀试验（RIPA）。
2.1 免疫印记试验（WB）
对于HIV抗体的确认诊断，它是首选的试验方法，其检验结果通常被当作判断其他检验方法优劣好坏的“金标准”。WB的敏感性在一般情况下不低于初筛试验，但是特异性很高，这主要是由于基于HIV不同抗原组分的浓缩和分离能够检测出针对不同抗原的抗体，故而可以通过WB检测初筛试验的准确性。试剂有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或者HIV-2型。
2.2 免疫荧光试验（IFA）
IFA具有经济、简便和快捷等优点，曾经被推荐用于诊断WB不确定的样品。其缺点是该方法需要昂贵的荧光显微镜和接受过良好训练的人员，其观察和试验结果易受到主观因素的影响。该试验首先将被HIV感染的淋巴细胞固定在玻璃片上并与待检血液发生反应，之后加入被荧光素标记后的抗人免疫球蛋白，透过荧光显微镜可以看到试验结果，如果细胞浆内出现特殊荧光表明该标本呈阳性。
2.3 条带免疫试验
该试验的操作方法和原理与免疫印记试验类似，唯一的区别在于条带免疫试验的抗原是化学合成或重组的多肽，并且该抗原是人工固定在条膜上。
2.4 放射免疫沉淀试验（RIPA）
此方法是目前敏感度和特异性最强的HIV检测方法，缺点是操作难度大且耗时过长，并且需要用到同位素。首先将被放射性同位素标记的氨基酸加入到被HIV感染的细胞培养基中，病毒在进行复制的过程中会将被标记的氨基酸融入到病毒的蛋白质中；接着用去垢剂将含有同位素的病毒细胞溶解，并用抗IgG A蛋白琼脂糖去除那些具有反应性的抗原。然后将得到的上层清液与待检的血清混合在一起，如果待检血清中含有HIV抗体，则被同位素标记的HIV抗原会与HIV抗体结合成沉淀。最后用电泳将沉淀中的病毒蛋白分离开来，与已知的分子量比较，并作出判断。
3 结束语
上文介绍的几种HIV病毒抗体的检测方法各有优缺点，临床应用也各有差异。由于艾滋病在全世界范围内迅速蔓延，感染的人数在不断增加，尤其是病毒亚型的发展使HIV病毒检测更加艰难，如何快速、准确的检测HIV病毒对于预防和控制艾滋病有着十分重要的意义。
参考文献
[1] 李会英. 艾滋病病毒抗体检测过程中的几点体会[J]. 中国民康医学，2007（11）.
[2] 慈云祥，冯军. 艾滋病（AIDS）病毒抗体检测方法研究进展[J]. 化学进展，1996（03）.
[3] 刘亚非，解艳秋. 艾滋病病毒（HIV）抗体检测实验结果分析与评价[J]. 中国卫生检查杂志，2003（06）.
【关键字】 HIV抗体 艾滋病 试验
引言
为了做好艾滋病的控制和预防工作，我们必须正确地对HIV病毒的感染作出诊断，在传染源上做好控制工作。目前检测人类免疫缺陷病毒（HIV）抗体是最常用的诊断艾滋病的方法，这种方法不但特异性、敏感性高，方法简单方便，最重要的原因是HIV抗体在HIV病毒感染后除了早期很短的“窗口期”外的整个生命周期内能够稳定的存在并可以被检测到。而本文着重讨论HIV抗体的检测方法，包括HIV抗体的筛查试验和HIV抗体的确认试验两部分。
1 HIV抗体的筛查试验
检测原理可以分为酶联免疫吸附法、免疫层析法和颗粒凝聚法。
1.1 酶联免疫吸附试验（ELISA）
酶联免疫吸附方法又称作酶标免疫分析方法（EIA），是美国食品和医药管理署（FDA）批准的艾滋病毒检查方法。自1985年第一代ELISA试剂诞生以来，随着医药技术和生物技术快速发展，ELISA已经发展到第三代的双抗原夹心法和第四代的抗原抗体联合检测法。目前已经应用的ELISA法有8种，国内使用最广泛的是第三代双抗原夹心法试剂，几乎不用第一代和第二代试剂。国际上有一些国家已经将第四代的ELISA试剂对血源进行筛查，该方法和第三代HIV-1/2试剂相比，检出结果时间要提前4-9天。
酶联免疫吸试验适用于对大批量的标本进行检测，是各大、中、小型医院和各级疾控机构筛查HIV抗体的主要技术方法。其基本原理是先将需要检测的抗体或抗原固定在固体载体的表面，然后将用酶标记后的抗体或抗原和被固定的住的相应的抗体和或抗原发生反应，加底物显色并用酶标仪测定检验结果。该方法可使用尿液、血液和唾液样品。
1.2 快速诊断试验
快速诊断试验具有简便、快捷、不要求特殊设备等优点，适用于基层和应急应用，其最大的缺点在于价格过高，特异性和敏感性低于ELISA，不适用于市内的血液筛选。快速诊断采用的基本原理有三种，即免疫层析、免疫斑点和乳胶凝集。目前在我国批准上市的有金标快速诊断试剂和Abbott生产的Determine试剂。金标法可以适用于初筛检测，凡是鉴定为阳性的人，需要用另外一种方法如ELISA或者蛋白印记法进行确定。而determine分为全血法和血清法两种，其中全血法效果更佳。除了这两种方法以外，还有尿液HIV检测法、唾液HIV检测法和家庭HIV检测法。尿液检验法敏感度较好，但是特异性较差，如果尿液被检测为阳性，还需做其他的检查。由美国食品和医药管理署（FDA）批准的Orasure唾液试剂特异性和敏感性均较高，适用于进行筛查。
1.3 免疫荧光试验
该方法作为HIV检验的补充方法于1992年获得FDA批准，具有较高的敏感性和特异性。运用免疫荧光试验测定HIV病毒抗体时一般选用的是间接方法，将HIV抗原和待检测的血清发生作用后，同有荧光标记的生物素抗人IgG结合。这种方法的优点是使用具有荧光标记的生物素抗人IgG可以检测发生于人体上的多个具有不同特异性反应，具有普遍适用性。该方法既可以检测抗体，又可以联合检测抗体抗原。有效试验的阳性、阴性对照必须符合试剂盒的规定。
2 HIV抗体的确认试验
确认试验主要包括免疫印迹试验（WB）、免疫荧光试验（IFA）、条带免疫试验（LIATEK HIVIII）和放射免疫沉淀试验（RIPA）。
2.1 免疫印记试验（WB）
对于HIV抗体的确认诊断，它是首选的试验方法，其检验结果通常被当作判断其他检验方法优劣好坏的“金标准”。WB的敏感性在一般情况下不低于初筛试验，但是特异性很高，这主要是由于基于HIV不同抗原组分的浓缩和分离能够检测出针对不同抗原的抗体，故而可以通过WB检测初筛试验的准确性。试剂有HIV-1/2混合型和单一的HIV-1或者HIV-2型。
2.2 免疫荧光试验（IFA）
IFA具有经济、简便和快捷等优点，曾经被推荐用于诊断WB不确定的样品。其缺点是该方法需要昂贵的荧光显微镜和接受过良好训练的人员，其观察和试验结果易受到主观因素的影响。该试验首先将被HIV感染的淋巴细胞固定在玻璃片上并与待检血液发生反应，之后加入被荧光素标记后的抗人免疫球蛋白，透过荧光显微镜可以看到试验结果，如果细胞浆内出现特殊荧光表明该标本呈阳性。
2.3 条带免疫试验
该试验的操作方法和原理与免疫印记试验类似，唯一的区别在于条带免疫试验的抗原是化学合成或重组的多肽，并且该抗原是人工固定在条膜上。
2.4 放射免疫沉淀试验（RIPA）
此方法是目前敏感度和特异性最强的HIV检测方法，缺点是操作难度大且耗时过长，并且需要用到同位素。首先将被放射性同位素标记的氨基酸加入到被HIV感染的细胞培养基中，病毒在进行复制的过程中会将被标记的氨基酸融入到病毒的蛋白质中；接着用去垢剂将含有同位素的病毒细胞溶解，并用抗IgG A蛋白琼脂糖去除那些具有反应性的抗原。然后将得到的上层清液与待检的血清混合在一起，如果待检血清中含有HIV抗体，则被同位素标记的HIV抗原会与HIV抗体结合成沉淀。最后用电泳将沉淀中的病毒蛋白分离开来，与已知的分子量比较，并作出判断。
3 结束语
上文介绍的几种HIV病毒抗体的检测方法各有优缺点，临床应用也各有差异。由于艾滋病在全世界范围内迅速蔓延，感染的人数在不断增加，尤其是病毒亚型的发展使HIV病毒检测更加艰难，如何快速、准确的检测HIV病毒对于预防和控制艾滋病有着十分重要的意义。
参考文献
[1] 李会英. 艾滋病病毒抗体检测过程中的几点体会[J]. 中国民康医学，2007（11）.
[2] 慈云祥，冯军. 艾滋病（AIDS）病毒抗体检测方法研究进展[J]. 化学进展，1996（03）.
[3] 刘亚非，解艳秋. 艾滋病病毒（HIV）抗体检测实验结果分析与评价[J]. 中国卫生检查杂志，2003（06）.