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[摘要】目的 探索编码测验、数字符号编码测验及符号搜索测验作为认知内表型的稳定性。方法 从重庆市主城区募集6～16岁的双生子，共募集122对双生子，用数字符号编码测验及符号搜索测验对双生子进行认知功能测定。并采取双生子颊黏膜标本以提取DNA进行卵型鉴定。分析三个测试的得分情况，评估双生子两个个体分值的相关系数。结果 最终有卵型鉴定结果的双生子共102对，同卵双生子组（以下用MZ表示）和异卵双生子组（以下用DZ表示）的年龄及性别分布无显著性差异（P>0.05），MZ组及DZ组编码测验、cording B及searching B相关系数分别为0.687和0.433，0.837和0.820，0.776和0.678，结果显示均有显著相关（P<0.05），且三个测验结果相关系数MZ组高于DZ组。结论 韦氏儿童智力测试中编码测验及韦氏儿童智力测试第三版中的数字符号编码测验、符号搜索测验所反应的信息处理速度和启动过程以及随机自由回忆和线索性回忆功能受遗传影响较大，适合作为认知内表型的指标。
[关键词】双生子；神经心理；韦氏儿童智力测试编码测验；韦氏儿童智力测试第三版数字符号编码测验；符号搜索测验；认知功能；内表型
[中图分类号】R749 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616（2016）11-21-04
我国儿童精神卫生问题的检出率约为7.03%～14.89%，内表型比疾病的外在表现更接近疾病的生物学基础，通过内表型研究疾病的遗传学基因具有显著优势，内表型的方法包括神经生理、生物化学及认知等。目前探讨的与精神疾病相关的认知内表型包括言语记忆，工作记忆，持续注意及反应抑制等。内表型在精神医学中的应用还处于初步探索阶段。应用双生子研究探索内表型稳定性是常用的重要方法之一，现有的双生子研究多集中于发达国家，通过双生子法探索儿童精神障碍的相关的认知内表型稳定性具有重要意义。
1资料与方法
1.1一般资料
自2010年开始，以教委-学校途径在重庆地区募集共同生活的6～16岁双生子，每对双生子均由同一抚养者抚养。排除严重的上肢残疾、躯体疾病及精神疾病者。受试者在签署书面知情同意书后进行测定及采集颊黏膜标本。共纳入双生子122对，同卵双生子男童共55例，女童共53例，异卵双生子男童为44例，女童为52例。
1.2方法
1.2.1神经认知功能评定工具 韦氏儿童智力测验中的编码测验、韦氏儿童智力测试第三版的数字符号编码测验（WAIS-ⅢDigit Symbol-cording B，以下简称为cording B）及符号搜索（WAIS-ⅢSymbol-searching B，以下简称为searching B）。韦氏儿童智力测试中编码测验和第三版中的数字符号编码测验均能很好的反应信息处理速度和启动过程，信息处理速度及启动过程与角回、内顶皮层、左侧额下回等脑区功能相关，三个神经心理测试同时可评定随机自由回忆和线索性回忆功能。
1.2.2卵型鉴定 所有受试双生子均采集颊黏膜拭子，常温下保存在装有缓冲液的试管，随后采用酚2氯仿法进行DNA提取，并采用STR分型法进行卵型鉴定。采用Promega公司的Power2Plex16系统进行16个基因座的同时扩增并用三色荧光镜检测15个STR基因座性别基因：PentaE，D18S51，D21S11，TH01，D3S1358，FGA，TPOX，D8S 1179，VWA，Amelogenin，Penta D，CSF 1 PO，D16S539，D7S820，D13S317和D5S818。以鉴定双生子对是同卵还是异卵。若两同性双生子在5个STR位点基因型完全一致，则作出MZ判断的可信度>99%。通过这种遗传分析，单卵双生子的可靠性可以达到0.1999。
1.3统计学方法
2结果
2.1 MZ组和DZ组一般人口学资料
共纳入双生子122对，有卵型鉴定结果的共102对。其中同卵双生子54对，异卵双生子48对。
对两组双生子的性别、年龄分别进行X2检验及t检验，结果显示差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
2.2 MZ组和DZ组数字符号编码测验及symbol-searching B、symbol-cording B测验正态性检验
102对双生子分为同卵组及异卵组，进行数字符号编码测验及symbol-searching B、symbol-cording B测验，对三个结果的得分进行Shapiro-Wilk正态性检验以确定相关分析统计方法，结果示除了DZ组searching B分数不符合正态分布外，其余均符合正态分布。见表2。
2.3 MZ组与DZ组编码测验及符号搜索测验在双生子问两个个体之间相关分析
将102对双生子按卵型鉴定结果分为同卵双生子及异卵双生子。将两组同时按大小双原则再行分组，根据编码测验、searching B及cording B分值情况分别对双生子中两个个体进行双变量相关分析，并比较两组的相关系数。根据上述正态检验结果，由于DZ组searching B的分值不符合正态分布，故进行双变量的Spearman相关分析。
用Fisher函数法将r值转化为Z值。估计MZ组Z值的95%CI及DZ组的Z值。从表3中可见编码测验、searching B及cording B的分值在双生子对大小双间有显著相关，且对比95%的可信区间发现两组相关系数具有可比性。三项测验分值的双生子对间相关系数MZ组均大于DZ组。
3讨论
迄今为止精神疾病的发病机制仍未明确，大量家系研究和双生子研究显示遗传在其中发挥重要作用。但对疾病的遗传学研究尚未得到一致的结论，如精神分裂症及双相情感障碍存在很多交叉基因，多年研究结果未发现与疾病相关的特异性基因。并且现有的精神疾病诊断和分类标准缺少生物学基础，传统的遗传研究仍未明确病因。内表型处于疾病和遗传基因之间，与遗传基因的联系更密切，内表型正在此基础上提出，目前内表型在精神医学中的应用还处于初步阶段。 探索内表型的稳定性除了家系研究以外，双生子研究也是分析和研究这一问题的重要方法。双生子研究的创始人Galton认为双生子的研究对探讨遗传因素和环境对人性格和智能形成的影响。瑞典从1959年即开始开展双生子研究工作，拥有1886年以来出生23 000对性别相同的双生子病史资料。英国伦敦精神病研究所于1996年建立研究儿童早期发育的双生子研究，15000对双生子已进入该研究登记系统，研究显示相同基因可能对儿童早期的语言和认知功能有重要作用。长期以来我国一直没有大规模的双生子登记系统，近年来该状况已开始改善，2002年青岛地区建立起有8583对双生子的信息库，为评价遗传、环境因素与慢性疾病发生的关系及易感基因等研究打下基础。但采用双生子研究的方法对儿童青少年精神卫生问题及认知发育的病因研究还有待启动。部分研究显示儿茶酚胺系统的基因DRD4、DAT1、COMT基因可能与一些儿童期的精神障碍发生有关，而与这些基因轻度相关的内表型存在异常，双生子研究探索儿童精神障碍的内表型稳定性具有重要意义。
本研究采用韦氏儿童智力测试中编码测验及韦氏儿童智力测试第三版中的symbol-searchingB、symbol-cording B测验测量认知加工中信息处理速度和启动过程，同时测定随机自由回忆和线索性回忆功能，通过比较同卵双生子组和异卵双生子组中两个个体的相关系数，定性的了解这部分认知功能受遗传因素影响较多。结果显示上述测验指标所反映的认知功能同卵双生子组及异卵双生子组的两个个体问均有显著相关，且同卵双生子组两个个体间的相关系数高于异卵双生子组。结果提示symbol-searching B、symbol-cording B测验所评定的认知功能受遗传影响可能性更大，且韦氏儿童智力测试第三版中的symbol-searching B、symbol-cording B测验稳定性更佳，可作为具有相对稳定及精确的内表型指标。正如相关研究显示多动症儿童组存在反应抑制功能障碍，精神分裂症患者在持续性注意，言语记忆和工作记忆方面存在缺陷，后续相关研究证实注意缺陷是精神分裂症的核心特征，同时Snitz等研究结果支持信息处理速度、执行功能的转换功能以及工作记忆功能受损作为精神分裂症易感性指标的观点。Milner应用威斯康星卡片测验进行精神疾病认知功能研究，发现威斯康星卡片测验中的持续错误数是区分脑损伤是否累及额叶的最敏感指标。
可见双生子研究对于内表型指标的探寻具有重要意义。分子遗传学研究以及人类基因组学研究的进展为今后研究提出更高要求，对双生子研究不只局限于单一的表现型变量，而应收集相关的性状和疾病信息及相关的环境因素，对象也不只局限于双生子本身，也应包括他们的家系成员。采用双生子研究方法对内表型进行探讨，可为寻找精确稳定及接近疾病本质的内表型提供基础，为精神疾病预防策略的制定提供一定参考依据，有助于发现传递疾病易感性的、假定的多基因体系中的可能基因。
[关键词】双生子；神经心理；韦氏儿童智力测试编码测验；韦氏儿童智力测试第三版数字符号编码测验；符号搜索测验；认知功能；内表型
[中图分类号】R749 [文献标识码]A [文章编号]2095-0616（2016）11-21-04
我国儿童精神卫生问题的检出率约为7.03%～14.89%，内表型比疾病的外在表现更接近疾病的生物学基础，通过内表型研究疾病的遗传学基因具有显著优势，内表型的方法包括神经生理、生物化学及认知等。目前探讨的与精神疾病相关的认知内表型包括言语记忆，工作记忆，持续注意及反应抑制等。内表型在精神医学中的应用还处于初步探索阶段。应用双生子研究探索内表型稳定性是常用的重要方法之一，现有的双生子研究多集中于发达国家，通过双生子法探索儿童精神障碍的相关的认知内表型稳定性具有重要意义。
1资料与方法
1.1一般资料
自2010年开始，以教委-学校途径在重庆地区募集共同生活的6～16岁双生子，每对双生子均由同一抚养者抚养。排除严重的上肢残疾、躯体疾病及精神疾病者。受试者在签署书面知情同意书后进行测定及采集颊黏膜标本。共纳入双生子122对，同卵双生子男童共55例，女童共53例，异卵双生子男童为44例，女童为52例。
1.2方法
1.2.1神经认知功能评定工具 韦氏儿童智力测验中的编码测验、韦氏儿童智力测试第三版的数字符号编码测验（WAIS-ⅢDigit Symbol-cording B，以下简称为cording B）及符号搜索（WAIS-ⅢSymbol-searching B，以下简称为searching B）。韦氏儿童智力测试中编码测验和第三版中的数字符号编码测验均能很好的反应信息处理速度和启动过程，信息处理速度及启动过程与角回、内顶皮层、左侧额下回等脑区功能相关，三个神经心理测试同时可评定随机自由回忆和线索性回忆功能。
1.2.2卵型鉴定 所有受试双生子均采集颊黏膜拭子，常温下保存在装有缓冲液的试管，随后采用酚2氯仿法进行DNA提取，并采用STR分型法进行卵型鉴定。采用Promega公司的Power2Plex16系统进行16个基因座的同时扩增并用三色荧光镜检测15个STR基因座性别基因：PentaE，D18S51，D21S11，TH01，D3S1358，FGA，TPOX，D8S 1179，VWA，Amelogenin，Penta D，CSF 1 PO，D16S539，D7S820，D13S317和D5S818。以鉴定双生子对是同卵还是异卵。若两同性双生子在5个STR位点基因型完全一致，则作出MZ判断的可信度>99%。通过这种遗传分析，单卵双生子的可靠性可以达到0.1999。
1.3统计学方法
2结果
2.1 MZ组和DZ组一般人口学资料
共纳入双生子122对，有卵型鉴定结果的共102对。其中同卵双生子54对，异卵双生子48对。
对两组双生子的性别、年龄分别进行X2检验及t检验，结果显示差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。
2.2 MZ组和DZ组数字符号编码测验及symbol-searching B、symbol-cording B测验正态性检验
102对双生子分为同卵组及异卵组，进行数字符号编码测验及symbol-searching B、symbol-cording B测验，对三个结果的得分进行Shapiro-Wilk正态性检验以确定相关分析统计方法，结果示除了DZ组searching B分数不符合正态分布外，其余均符合正态分布。见表2。
2.3 MZ组与DZ组编码测验及符号搜索测验在双生子问两个个体之间相关分析
将102对双生子按卵型鉴定结果分为同卵双生子及异卵双生子。将两组同时按大小双原则再行分组，根据编码测验、searching B及cording B分值情况分别对双生子中两个个体进行双变量相关分析，并比较两组的相关系数。根据上述正态检验结果，由于DZ组searching B的分值不符合正态分布，故进行双变量的Spearman相关分析。
用Fisher函数法将r值转化为Z值。估计MZ组Z值的95%CI及DZ组的Z值。从表3中可见编码测验、searching B及cording B的分值在双生子对大小双间有显著相关，且对比95%的可信区间发现两组相关系数具有可比性。三项测验分值的双生子对间相关系数MZ组均大于DZ组。
3讨论
迄今为止精神疾病的发病机制仍未明确，大量家系研究和双生子研究显示遗传在其中发挥重要作用。但对疾病的遗传学研究尚未得到一致的结论，如精神分裂症及双相情感障碍存在很多交叉基因，多年研究结果未发现与疾病相关的特异性基因。并且现有的精神疾病诊断和分类标准缺少生物学基础，传统的遗传研究仍未明确病因。内表型处于疾病和遗传基因之间，与遗传基因的联系更密切，内表型正在此基础上提出，目前内表型在精神医学中的应用还处于初步阶段。 探索内表型的稳定性除了家系研究以外，双生子研究也是分析和研究这一问题的重要方法。双生子研究的创始人Galton认为双生子的研究对探讨遗传因素和环境对人性格和智能形成的影响。瑞典从1959年即开始开展双生子研究工作，拥有1886年以来出生23 000对性别相同的双生子病史资料。英国伦敦精神病研究所于1996年建立研究儿童早期发育的双生子研究，15000对双生子已进入该研究登记系统，研究显示相同基因可能对儿童早期的语言和认知功能有重要作用。长期以来我国一直没有大规模的双生子登记系统，近年来该状况已开始改善，2002年青岛地区建立起有8583对双生子的信息库，为评价遗传、环境因素与慢性疾病发生的关系及易感基因等研究打下基础。但采用双生子研究的方法对儿童青少年精神卫生问题及认知发育的病因研究还有待启动。部分研究显示儿茶酚胺系统的基因DRD4、DAT1、COMT基因可能与一些儿童期的精神障碍发生有关，而与这些基因轻度相关的内表型存在异常，双生子研究探索儿童精神障碍的内表型稳定性具有重要意义。
本研究采用韦氏儿童智力测试中编码测验及韦氏儿童智力测试第三版中的symbol-searchingB、symbol-cording B测验测量认知加工中信息处理速度和启动过程，同时测定随机自由回忆和线索性回忆功能，通过比较同卵双生子组和异卵双生子组中两个个体的相关系数，定性的了解这部分认知功能受遗传因素影响较多。结果显示上述测验指标所反映的认知功能同卵双生子组及异卵双生子组的两个个体问均有显著相关，且同卵双生子组两个个体间的相关系数高于异卵双生子组。结果提示symbol-searching B、symbol-cording B测验所评定的认知功能受遗传影响可能性更大，且韦氏儿童智力测试第三版中的symbol-searching B、symbol-cording B测验稳定性更佳，可作为具有相对稳定及精确的内表型指标。正如相关研究显示多动症儿童组存在反应抑制功能障碍，精神分裂症患者在持续性注意，言语记忆和工作记忆方面存在缺陷，后续相关研究证实注意缺陷是精神分裂症的核心特征，同时Snitz等研究结果支持信息处理速度、执行功能的转换功能以及工作记忆功能受损作为精神分裂症易感性指标的观点。Milner应用威斯康星卡片测验进行精神疾病认知功能研究，发现威斯康星卡片测验中的持续错误数是区分脑损伤是否累及额叶的最敏感指标。
可见双生子研究对于内表型指标的探寻具有重要意义。分子遗传学研究以及人类基因组学研究的进展为今后研究提出更高要求，对双生子研究不只局限于单一的表现型变量，而应收集相关的性状和疾病信息及相关的环境因素，对象也不只局限于双生子本身，也应包括他们的家系成员。采用双生子研究方法对内表型进行探讨，可为寻找精确稳定及接近疾病本质的内表型提供基础，为精神疾病预防策略的制定提供一定参考依据，有助于发现传递疾病易感性的、假定的多基因体系中的可能基因。