【摘 要】
：
目的 设计并构建能够有效干扰Livin和Survivin基因的表达,且能在胞内稳定转录的表达载体;研究Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染对肝癌细胞增殖活性及凋亡的影响.方法
【机 构】
：
十堰市人民医院消化内科 湖北十堰442000
论文部分内容阅读
目的 设计并构建能够有效干扰Livin和Survivin基因的表达,且能在胞内稳定转录的表达载体;研究Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染对肝癌细胞增殖活性及凋亡的影响.方法 根据设计siRNA的原理,分别从Livin、Survivin基因序列中选取两段siRNA靶序列模板,以其为基础进行shRNA真核表达载体Pgenesil-1-Livin和Pgenesil-1-Survivin的构建.将传代培养的肝癌HepG2细胞株分为五组:设阴性对照组(不转染)、空白质粒组(单独转染Pgenesil-1-NC)、Survivin组(单独转染Pgenesil-1-Survivin)、Livin组(单独转染Pgenesil-1-Livin)和共转染组(联合转染Pgenesil-1-Livin和Pgenesil-1-Survivin),对各组细胞进行单独或联合转染.为检测转染2d后Livin和Survivin蛋白表达的情况、转染后三个不同时间点(48 h、60h、72 h)的细胞增殖活性变化及转染后48 h的细胞凋亡率,分别采用了蛋白质印迹法、MTT法及TUNEL法.结果 两种表达载体的测序结果与预期相同.与阴性对照组及空白质粒组相比,转染后2d,Livin组、Survivin组和共转染组的蛋白表达均明显下降(P＜0.05),而与Livin组和Survivin组相比,共转染组蛋白表达的下降更为显著(P＜0.05);各组细胞在3个检测时间均表现出增殖活性的下降,且与Livin组和Survivin组相比,共转染组在三个检测时间的细胞生长抑制率(IR)值分别为28.541±0.842、21.644±0.129、15.532±1.12,明显高于前者(P＜0.05);转染后48 h,共转染组凋亡率为53.956％±4.332％,明显大于Livin组和Survivin组(P＜0.05).结论 成功设计并构建体内可稳定转录且能有效干扰目的基因表达的质粒载体.对肝癌细胞进行Livin shRNA和Survivin shRNA的联合转染,可更大程度下调相应基因的表达,降低Livin蛋白和Survivin蛋白的胞内含量,可更为有效地阻碍癌细胞的异常增殖,促进癌细胞的程序性凋亡.
其他文献
【摘要】对509名幼儿园教师的组织公正感和工作投入进行问卷调查发现，幼儿园教师组织公正感整体处于中等偏上水平，工作投入整体处于中等偏上水平，且组织公正感与工作投入呈显著正相关，尤其是领导公正感和信息公正感对工作投入有显著预测作用。建议幼儿园建立科学的薪酬管理体制，健全幼儿园民主制度，改进幼儿园管理方式，优化沟通机制，从而增强幼儿园教师的组织公正感，使其更加投入工作。 【关键词】幼儿园教师;组织公
近年来,由于负责《新中国出土墓志》(全书约30卷)的编审,参加《长沙走马楼三国吴简》(全书约10卷)的整理,对此前倾注不少感情的高昌史研究用力不多。但学界师友并未因此忘记
财务风险是企业在生产运营整个过程中不可避免的,企业只能通过有效的控制措施降低风险的发生,而不能将风险完全消灭,随着市场经济的快速发展,财务风险变得越来越多样,每种行
第多斯惠说过：“一个不好的教师是奉送真理，而一个好的教师则是教人发现真理。”实践证明：树立全面的教学任务观，渗透创造教育的精神，深化教学改革，是培养小学生创造兴趣和能力的主
抑郁症是精神科的常见疾病,其发病率、复发率均较高,给社会带来重大负担。现阶段,临床及研究领域逐渐将痊愈作为抑郁症的治疗目标。临床主要采用药物治疗抑郁症,同时参与一定
为了更好地提高小学英语的综合教学质量,教师需要合理的开展口语教学策略,培养小学生的英语基本素养.下文就口语运用在小学英语课堂中的重要性进行研究分析.
本文从选、读、编、演、评五个方面阐述了《鸿门宴》排演步骤课本剧的独特魅力。
This article elaborates the unique charm of the textbook drama of “Hongmen Banquet
本文笔者结合自己多年的培训教学经验,探讨了设备检修培训实训教学在教学计划制定、教学实施和教学考核三方面的新思路。
In this paper, the author combined his many yea
2005年10月20日至22日,自治区地方志地州市主任座谈会在库尔勒市召开。自治区地方志编委会党组书记、专职副主任崔书杰,自治区地方志编委会党组成员、专职副主任武星斗出席会
铜川境内资源丰富，煤炭保有储量29亿吨，有铜川和焦坪两个自然矿区，含煤面积1298平方公里，占国土面积的33.4％，油页岩、煤层气、石灰石、陶瓷粘土储量居全省前列。铜川因煤而兴、先矿后市，是以煤炭、水泥、电解铝为主的工业城市，已累计为国家输出原煤4亿吨、水泥4000万吨。但是，以往“挖煤卖资源、挖石头烧水泥”的粗放型增长方式，一度使铜川陷入困境。近年来，在省委、省政府的正确领导和关心支持下，铜川市