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【摘 要】目的：对一种乳胶比浊法测定全程CRP的试剂盒进行性能评价。方法：采用日立7600全自动生化分析仪，对乳胶比浊法检测全程CRP的试剂盒分别进行不精密度、不准确度、线性范围、检测最低限、干扰试验的验证。结果：全程CRP批内CV<3.5%，批间CV< 5.5%。不准确度试验表明：选择浓度范围0.2-11.5mg/L的40份标本，全程CRP试剂盒与超敏CRP相关性良好（R2=0.09998，P<0.05）；选择浓度范围在2.5-320mg/L的40份标本，全程CRP与普通CRP的相关性良（R2=0.09996，P<0.05）。全程CRP试剂盒线性范围可达0.1-350.0mg/L，检测最低限为0.1 mg/L。当样品中血红蛋白达<4820mg/L，胆红素<500 mg/L，甘油三酯<5.5mmol/L均不干扰测定结果。结论：乳胶比浊法测定全程CRP具有准确度高、稳定性好、抗干扰能力强、成本低、快速方便等特点，适宜于在临床推广。
【关键词】C反应蛋白；乳胶比浊法
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）06-0467-01
CRP是肝脏合成的一种急性时相反应蛋白，因能与肺炎球菌细胞壁C多糖结合而得名。正常人血清含量极微，但在组织损伤、恶性肿瘤、心肌梗死、败血症等疾病时含量可迅速升高，CRP被认为是监测感染最好的广谱性标志物[1-2]。而且低水平的CRP还应用于冠心病、脑卒中、周围血管栓塞等疾病诊断和预测，是独立于脂类之外的危险因子[3]。近些年CRP的测定方法主要有酶联免疫法、速率比浊法、胶乳凝集法以及胶乳超敏比浊法等，出現了普通CRP和超敏CRP检测，两者实属同一种物质，但因其线性范围和灵敏度不同，临床多采用两种试剂检测其含量，费用高，操作比较繁琐。日立和光最新研制出乳胶比浊法测定全程CRP试剂盒，具有宽检测范围和高灵敏度的优点，完全覆盖普通CRP和超敏CRP检测范围，可广泛满足临床需求。本研究运用日立7600全自动生化分析仪对乳胶比浊法测定全程CRP试剂盒进行性能评价，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 主要仪器和试剂
日立7600全自动生化分析仪（日本日立公司），IMMAGE800全自动免疫分析仪（美国Beckman Coulter 公司）。乳胶比浊法全程CRP试剂盒，日本和光纯药工业株式会社产品 ；普通CRP试剂和超敏CRP试剂盒，美国Beckman Coulter公司产品。
1.2 标本来源：均为临床收集的血清标本。
1.3 测定原理：血清中的CRP与山羊抗人CRP抗体乳胶颗粒发生抗原抗体反应，产生浑浊，浊度与样本中的CRP含量呈正比。它是根据乳胶颗粒的大小与检测灵敏度相关的原理，加入一定比例大小不同的乳胶颗粒，使CRP检测范围变宽，能检测不同水平的CRP。
1.4 不精密度试验：选择CRP高值（80～130mg/L）、中值（8～14mg/L ）、低值（0.1～1.0mg/L）3个水平制成混合血清进行试验评价，批内精密度为对同一样品同时重复检测20次，通过计算其均值和标准差得出批内CV。批间精密度为对每个样品每天检测1次，连续20d，通过计算其均值和标准差得出批间CV。
1.5 不准确度试验：将试验分为两组：一组CRP浓度范围在0.2～11.5mg/L血清标本40份，分别用全程CRP试剂与hs-CRP试剂检测；另一组CRP浓度范围在2.5～320mg/L血清标本40份，分别用全程CRP试剂与普通CRP试剂检测。即每日取8份血清样品，按1～8顺序和8～1顺序测定2次，连续测定5d。记录测定结果进行相关性分析。
1.6 线性范围：用低浓度CRP（0.1mg/L）血清分别与较高浓度CRP（10.6 mg/L ）血清以及高浓度CRP（349.3mg/L）血清，按照9：1，8：2，6：4，4：6，2：8，1：9的比例混合配制成浓度梯度进行检测。每个浓度测定2次，计算平均浓度。每个标本重复测量2次，记录结果。将实测值与理论值作比较，作直线回归方程。
1.7 检测最低限试验：选取无黄疸、溶血、脂血的血清标本30份，测定血清空白吸光度值，计算其标准差，以3倍的标准差对应吸光度为最低检测限。
1.8 干扰试验：在血清中各自添加不同浓度梯度胆红素、血红蛋白、甘油三脂，同时测定这些标本的CRP浓度，每个浓度测定2份，结果取均值，计算影响度。
2 结果
2.2 不准确度试验结果
使用全程CRP试剂与hs-CRP试剂对40份临床标本进行检测，其回归方程：Y=0.9865X+0.0205，相关系数R2=0.9998，P<0.05，表明两组结果无统计学差异，高度相关；使用全程CRP试剂与普通CRP试剂对40份临床标本进行检测，其回归方程：Y=1.0115X+0.0117，相关系数R2=0.9996，P<0.05，表明两组结果无统计学差异，高度相关。
2.3线性范围和最低检测限结果：
CRP系列浓度理论值为X，测定均值为实测值Y，建立回归方程为：Y=1.0296X+0.4523，相关系数R2=0.9992，P<0.05，表明当CRP浓度为0.1-349.3mg/L时线性良好。根据以上方法确定最低检测线为0.1mg/L。
2.4 干扰试验结果
血红蛋白达<5000mg/L，胆红素<500 mg/L，甘油三酯<5.5mmol/L测定结果影响度均小于<5%，低于精密度的标准，表明此两种干扰物对全程CRP的测定均无明显干扰。
3 讨论
CRP作为一个非特异性炎症指标，已被临床广泛应用，最新研究表明在正常值以下更微量的CRP变化与心血管事件的发生密切相关。一般认为我国健康人群的CRP中位数范围为0.58-1.13 mg/L，美国CDC与美国心脏协会（AHA）建议，可根据CRP水平对患者心血管病危险分类：<1mg/L为相对低危险，l～3mg/L为中度危险，>3mg/L为高度危险。这些就要求有更灵敏、更精确、更宽检测范围的CRP测定方法。本实验所用全程CRP试剂盒较好的把乳胶免疫比浊法和全自动生化分析仪结合在一起，它所特有的双乳胶颗粒运用，其中大乳胶颗粒包被了高反应性抗体以提高分析灵敏度，小乳胶颗粒包被了低反应性抗体以此来扩展检测范围，使得检测灵敏度及检测范围大大改善。本文对全程CRP试剂盒进行性能评价，其精密度、准确度、线性范围、最低检测线以及干扰试验均取得良好的结果。乳胶比浊法测定全程CRP自动化程度高，操作快速，准确，适宜于临床批量应用。
参考文献：
[1] Mora Samia，Rifai Nader，Buring Julie E，et al. Additive Value of Immunoassay-Measured Fibrinogen and High-Sensitivity C-Reactive Protein Levels for Predicting Incident Cardiovascular Events. Circulation.2006，114：381-387.
[2] 杭建峰，吴英松，徐伟文，等.超敏C-反应蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立.第四军医大学学报，2007，28（3）：279-282.
[3] 李义龙，王萌，唐志毅，等.全程C反应蛋白试剂盒方法学比对评价.中华检验医学杂志，2009，32（9）：1069-1073.
【关键词】C反应蛋白；乳胶比浊法
【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2013）06-0467-01
CRP是肝脏合成的一种急性时相反应蛋白，因能与肺炎球菌细胞壁C多糖结合而得名。正常人血清含量极微，但在组织损伤、恶性肿瘤、心肌梗死、败血症等疾病时含量可迅速升高，CRP被认为是监测感染最好的广谱性标志物[1-2]。而且低水平的CRP还应用于冠心病、脑卒中、周围血管栓塞等疾病诊断和预测，是独立于脂类之外的危险因子[3]。近些年CRP的测定方法主要有酶联免疫法、速率比浊法、胶乳凝集法以及胶乳超敏比浊法等，出現了普通CRP和超敏CRP检测，两者实属同一种物质，但因其线性范围和灵敏度不同，临床多采用两种试剂检测其含量，费用高，操作比较繁琐。日立和光最新研制出乳胶比浊法测定全程CRP试剂盒，具有宽检测范围和高灵敏度的优点，完全覆盖普通CRP和超敏CRP检测范围，可广泛满足临床需求。本研究运用日立7600全自动生化分析仪对乳胶比浊法测定全程CRP试剂盒进行性能评价，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 主要仪器和试剂
日立7600全自动生化分析仪（日本日立公司），IMMAGE800全自动免疫分析仪（美国Beckman Coulter 公司）。乳胶比浊法全程CRP试剂盒，日本和光纯药工业株式会社产品 ；普通CRP试剂和超敏CRP试剂盒，美国Beckman Coulter公司产品。
1.2 标本来源：均为临床收集的血清标本。
1.3 测定原理：血清中的CRP与山羊抗人CRP抗体乳胶颗粒发生抗原抗体反应，产生浑浊，浊度与样本中的CRP含量呈正比。它是根据乳胶颗粒的大小与检测灵敏度相关的原理，加入一定比例大小不同的乳胶颗粒，使CRP检测范围变宽，能检测不同水平的CRP。
1.4 不精密度试验：选择CRP高值（80～130mg/L）、中值（8～14mg/L ）、低值（0.1～1.0mg/L）3个水平制成混合血清进行试验评价，批内精密度为对同一样品同时重复检测20次，通过计算其均值和标准差得出批内CV。批间精密度为对每个样品每天检测1次，连续20d，通过计算其均值和标准差得出批间CV。
1.5 不准确度试验：将试验分为两组：一组CRP浓度范围在0.2～11.5mg/L血清标本40份，分别用全程CRP试剂与hs-CRP试剂检测；另一组CRP浓度范围在2.5～320mg/L血清标本40份，分别用全程CRP试剂与普通CRP试剂检测。即每日取8份血清样品，按1～8顺序和8～1顺序测定2次，连续测定5d。记录测定结果进行相关性分析。
1.6 线性范围：用低浓度CRP（0.1mg/L）血清分别与较高浓度CRP（10.6 mg/L ）血清以及高浓度CRP（349.3mg/L）血清，按照9：1，8：2，6：4，4：6，2：8，1：9的比例混合配制成浓度梯度进行检测。每个浓度测定2次，计算平均浓度。每个标本重复测量2次，记录结果。将实测值与理论值作比较，作直线回归方程。
1.7 检测最低限试验：选取无黄疸、溶血、脂血的血清标本30份，测定血清空白吸光度值，计算其标准差，以3倍的标准差对应吸光度为最低检测限。
1.8 干扰试验：在血清中各自添加不同浓度梯度胆红素、血红蛋白、甘油三脂，同时测定这些标本的CRP浓度，每个浓度测定2份，结果取均值，计算影响度。
2 结果
2.2 不准确度试验结果
使用全程CRP试剂与hs-CRP试剂对40份临床标本进行检测，其回归方程：Y=0.9865X+0.0205，相关系数R2=0.9998，P<0.05，表明两组结果无统计学差异，高度相关；使用全程CRP试剂与普通CRP试剂对40份临床标本进行检测，其回归方程：Y=1.0115X+0.0117，相关系数R2=0.9996，P<0.05，表明两组结果无统计学差异，高度相关。
2.3线性范围和最低检测限结果：
CRP系列浓度理论值为X，测定均值为实测值Y，建立回归方程为：Y=1.0296X+0.4523，相关系数R2=0.9992，P<0.05，表明当CRP浓度为0.1-349.3mg/L时线性良好。根据以上方法确定最低检测线为0.1mg/L。
2.4 干扰试验结果
血红蛋白达<5000mg/L，胆红素<500 mg/L，甘油三酯<5.5mmol/L测定结果影响度均小于<5%，低于精密度的标准，表明此两种干扰物对全程CRP的测定均无明显干扰。
3 讨论
CRP作为一个非特异性炎症指标，已被临床广泛应用，最新研究表明在正常值以下更微量的CRP变化与心血管事件的发生密切相关。一般认为我国健康人群的CRP中位数范围为0.58-1.13 mg/L，美国CDC与美国心脏协会（AHA）建议，可根据CRP水平对患者心血管病危险分类：<1mg/L为相对低危险，l～3mg/L为中度危险，>3mg/L为高度危险。这些就要求有更灵敏、更精确、更宽检测范围的CRP测定方法。本实验所用全程CRP试剂盒较好的把乳胶免疫比浊法和全自动生化分析仪结合在一起，它所特有的双乳胶颗粒运用，其中大乳胶颗粒包被了高反应性抗体以提高分析灵敏度，小乳胶颗粒包被了低反应性抗体以此来扩展检测范围，使得检测灵敏度及检测范围大大改善。本文对全程CRP试剂盒进行性能评价，其精密度、准确度、线性范围、最低检测线以及干扰试验均取得良好的结果。乳胶比浊法测定全程CRP自动化程度高，操作快速，准确，适宜于临床批量应用。
参考文献：
[1] Mora Samia，Rifai Nader，Buring Julie E，et al. Additive Value of Immunoassay-Measured Fibrinogen and High-Sensitivity C-Reactive Protein Levels for Predicting Incident Cardiovascular Events. Circulation.2006，114：381-387.
[2] 杭建峰，吴英松，徐伟文，等.超敏C-反应蛋白时间分辨荧光免疫分析法的建立.第四军医大学学报，2007，28（3）：279-282.
[3] 李义龙，王萌，唐志毅，等.全程C反应蛋白试剂盒方法学比对评价.中华检验医学杂志，2009，32（9）：1069-1073.