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摘 要:该文在分析检测天然抗氧化物质抗自由基的性能,借助于3种分光光度法来比较研究。在3种分光度法对自由基进行分析检测,包括对抗氧化剂的抗自由基性能进行检测的方法上,可适应相关研究工作或者常规实验室检测自由基的需要。
关键词:分光光度法 天然抗氧化物质 抗自由基性能
中图分类号:0657 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2015)04(c)-0247-01
1 DPPH自由基捕获分光光度法分析
1.1 实验部分
(1)仪器及试剂。选取型号752的分光光度计,DPPH溶液的浓度为0.1777nmol/L。混合磷酸盐缓冲溶液pH值为6.88。抗氧化剂样品溶液的浓度是10.5g/L。没食子酸丙酯和葡萄籽提取物,天然抗氧化剂,最后是分离制备的灯盏花素。(2)实验方法。选取pH6.88混合磷酸盐缓冲溶液添加10mL比色管,再加入DPPH溶液4mL,混合均匀后并适当添加抗氧化剂溶液,用蒸馏水来补充体积,10min之后于520nm区域对吸光度进行测算。在抗氧化剂清除DPPH自由基的比率上,按照K/(%)=[1—(Ai—Aj)/Ac] ×100来计算。
1.2 结果与讨论
在实验中,选取不同体积的抗氧化剂进行添加,通过测定Ai、Aj、Ac的值,从而得到Ai—Aj的数值,并计算出K,也即自由基清除率,如图1所示。
在图1中,1、2、3分别表示没食子丙酸脂、葡萄籽提取物、灯盏花素。所以就以上物质捕获DPPH自由基的能力,一般和抗氧化剂使用量形成量效关系,而且增加抗氧化剂使用量的话,就会捕获到更多的自由基。
2 亚硝基R盐-Co3+褪色法分析
2.1 实验部分
(1)仪器及试剂。选用型号为752的分光光度计,亚硝酸R盐溶液浓度为0.00156mol/L。CoSO4溶液浓度为0.00050mol/L。H2O2的体积分数为1.8%。pH值为7.4的KH2PO4缓冲液,pH值为9.2的Na2CO3溶液。(2)实验方法。依次把pH9.2缓冲液2mL,CoSO4溶液1mL,亚硝酸R盐1mL,H2O2溶液1mL加入到10mL的比色管中,并用蒸馏水稀释。放置在37℃水浴内,保持45min恒温。在494nm区域对吸光度Ab进行测量,同时对没有添加的H2O2吸光度Ao进行测量。其中用△A=Ao—Ab来表示自由基产生量。
2.2 结果与讨论
该实验说明,不断增加反应时间后,△A的增长速度反而下降,而褪色速度则更快地进行下降。在反应到达40min之后,体系没有再发生变化。在分析抗羟自由基氧化性能上,选取了三种抗氧物质样品,具体结果如图2所示。1、2、3分别表示没食子丙酸脂、葡萄籽提取物和灯盏花素。表明当对抗氧剂浓度再次增加时,表观抗羟自由基几乎不会增加氧化率。同时抗羟自由基的氧化能力,从高到低分别是没食子酸丙酯、葡萄籽提取物、灯盏花素。
3 连苯三酚红褪色光度法分析
3.1 实验部分
(1)仪器及试剂。选用型号为752的分光光度计。H2O2的体积分数为1.8%。连苯三酚红溶液的浓度为0.0001mol/L。EDTA-Fe2+溶液的浓度为0.0038mol/L。Na2CO3缓冲液的浓度为0.1mol/L,pH值为9.1。(2)实验方法。依次把pH9.2的Na2CO3缓冲溶液2ml,EDTA-Fe2+溶液0.7mL,连苯三酚红溶液3.5mL,体积分数为0.6的H2O2液体0.7mL加入到10mL的比色管中,并且利用蒸馏水来稀释到刻度位置。在对吸光度AS的测定上,抗羟自由基氧化率S=(As—Ab)/(Ao—Ab)×100。
3.2 结果与讨论
该实验说明,体系褪色速度随着反应温度的提高而增加。根据实验方法,选取3种抗氧化物,并进行抗羟自由基氧化性能上的研究。在各个抗氧化试剂不同使用量的情况下,羟自由基氧化剂抑制率。
综上所述,相对于灯盏花素提取物,没食子酸丙酯以及葡萄籽提取物具有更优的抗氧化性。不仅可以清除40%~80%左右的自由基,而且抗氧化能力和清除氧自由基的作用相对理想。
参考文献
[1] 孙存普.由基生自物学导论[M].合肥:中国科学技术大学出版社,2010.
[2] 裘祖文.电子共旋共振波谱[M].北京:科学出版社,2010.
关键词:分光光度法 天然抗氧化物质 抗自由基性能
中图分类号:0657 文献标识码:A 文章编号:1672-3791(2015)04(c)-0247-01
1 DPPH自由基捕获分光光度法分析
1.1 实验部分
(1)仪器及试剂。选取型号752的分光光度计,DPPH溶液的浓度为0.1777nmol/L。混合磷酸盐缓冲溶液pH值为6.88。抗氧化剂样品溶液的浓度是10.5g/L。没食子酸丙酯和葡萄籽提取物,天然抗氧化剂,最后是分离制备的灯盏花素。(2)实验方法。选取pH6.88混合磷酸盐缓冲溶液添加10mL比色管,再加入DPPH溶液4mL,混合均匀后并适当添加抗氧化剂溶液,用蒸馏水来补充体积,10min之后于520nm区域对吸光度进行测算。在抗氧化剂清除DPPH自由基的比率上,按照K/(%)=[1—(Ai—Aj)/Ac] ×100来计算。
1.2 结果与讨论
在实验中,选取不同体积的抗氧化剂进行添加,通过测定Ai、Aj、Ac的值,从而得到Ai—Aj的数值,并计算出K,也即自由基清除率,如图1所示。
在图1中,1、2、3分别表示没食子丙酸脂、葡萄籽提取物、灯盏花素。所以就以上物质捕获DPPH自由基的能力,一般和抗氧化剂使用量形成量效关系,而且增加抗氧化剂使用量的话,就会捕获到更多的自由基。
2 亚硝基R盐-Co3+褪色法分析
2.1 实验部分
(1)仪器及试剂。选用型号为752的分光光度计,亚硝酸R盐溶液浓度为0.00156mol/L。CoSO4溶液浓度为0.00050mol/L。H2O2的体积分数为1.8%。pH值为7.4的KH2PO4缓冲液,pH值为9.2的Na2CO3溶液。(2)实验方法。依次把pH9.2缓冲液2mL,CoSO4溶液1mL,亚硝酸R盐1mL,H2O2溶液1mL加入到10mL的比色管中,并用蒸馏水稀释。放置在37℃水浴内,保持45min恒温。在494nm区域对吸光度Ab进行测量,同时对没有添加的H2O2吸光度Ao进行测量。其中用△A=Ao—Ab来表示自由基产生量。
2.2 结果与讨论
该实验说明,不断增加反应时间后,△A的增长速度反而下降,而褪色速度则更快地进行下降。在反应到达40min之后,体系没有再发生变化。在分析抗羟自由基氧化性能上,选取了三种抗氧物质样品,具体结果如图2所示。1、2、3分别表示没食子丙酸脂、葡萄籽提取物和灯盏花素。表明当对抗氧剂浓度再次增加时,表观抗羟自由基几乎不会增加氧化率。同时抗羟自由基的氧化能力,从高到低分别是没食子酸丙酯、葡萄籽提取物、灯盏花素。
3 连苯三酚红褪色光度法分析
3.1 实验部分
(1)仪器及试剂。选用型号为752的分光光度计。H2O2的体积分数为1.8%。连苯三酚红溶液的浓度为0.0001mol/L。EDTA-Fe2+溶液的浓度为0.0038mol/L。Na2CO3缓冲液的浓度为0.1mol/L,pH值为9.1。(2)实验方法。依次把pH9.2的Na2CO3缓冲溶液2ml,EDTA-Fe2+溶液0.7mL,连苯三酚红溶液3.5mL,体积分数为0.6的H2O2液体0.7mL加入到10mL的比色管中,并且利用蒸馏水来稀释到刻度位置。在对吸光度AS的测定上,抗羟自由基氧化率S=(As—Ab)/(Ao—Ab)×100。
3.2 结果与讨论
该实验说明,体系褪色速度随着反应温度的提高而增加。根据实验方法,选取3种抗氧化物,并进行抗羟自由基氧化性能上的研究。在各个抗氧化试剂不同使用量的情况下,羟自由基氧化剂抑制率。
综上所述,相对于灯盏花素提取物,没食子酸丙酯以及葡萄籽提取物具有更优的抗氧化性。不仅可以清除40%~80%左右的自由基,而且抗氧化能力和清除氧自由基的作用相对理想。
参考文献
[1] 孙存普.由基生自物学导论[M].合肥:中国科学技术大学出版社,2010.
[2] 裘祖文.电子共旋共振波谱[M].北京:科学出版社,2010.