【摘 要】
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目的 验证甲基莲心碱(neferine,Nef)通过阻断ROCK通路对非小细胞肺癌H1299细胞迁移和侵袭的抑制作用.方法 取H1299细胞体外培养,经不同浓度的Nef处理,CCK-8法检测H1299细胞活力确定实验组浓度.细胞划痕、Transwell小室实验检测H1299细胞的迁移和侵袭能力,酶联免疫吸附法检测肺癌细胞分泌的基质金属蛋白MMP-2、MMP-9的表达,实时荧光定量PCR和Western blot法检测H1299细胞ROCK1蛋白水平;应用AutoDock半柔性对接方法模拟了Nef与ROCK
【机 构】
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南京中医药大学药学院,江苏 南京 210046
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目的 验证甲基莲心碱(neferine,Nef)通过阻断ROCK通路对非小细胞肺癌H1299细胞迁移和侵袭的抑制作用.方法 取H1299细胞体外培养,经不同浓度的Nef处理,CCK-8法检测H1299细胞活力确定实验组浓度.细胞划痕、Transwell小室实验检测H1299细胞的迁移和侵袭能力,酶联免疫吸附法检测肺癌细胞分泌的基质金属蛋白MMP-2、MMP-9的表达,实时荧光定量PCR和Western blot法检测H1299细胞ROCK1蛋白水平;应用AutoDock半柔性对接方法模拟了Nef与ROCK1之间的结合模式和亲合力.结果 甲基莲心碱实验组剂量确定为4、6和10μmol·L-1.这3种浓度Nef对H1299肺癌细胞的迁移和侵袭均有一定的抑制作用,且呈现浓度依赖性;同时Nef下调与这种癌细胞迁移、侵袭有关的MMP-2、MMP-9和ROCK1蛋白表达;另外,Nef与ROCK1的亲合力明显大于ROCK抑制剂法舒地尔,且与ROCK1的A链结合力更强.结论 Nef作为一种潜在的抗癌天然化合物,通过下调与肿瘤细胞迁移和侵袭相关分子MMP-2、MMP-9和ROCK1的表达,进而发挥抑制非小细胞肺癌细胞迁移和侵袭的作用.
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