【摘 要】
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选择羊痘病毒RNA聚合酶RPO30进行分析,为进行RNAi羊痘病毒研究,进行目的基因的初步筛选.PCR扩增RPO30基因,连入pMD18-T simple载体并转化DH5a大肠杆菌.经蓝白斑筛选挑选白斑
【机 构】
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甘肃农业大学动物医学院,中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室
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选择羊痘病毒RNA聚合酶RPO30进行分析,为进行RNAi羊痘病毒研究,进行目的基因的初步筛选.PCR扩增RPO30基因,连入pMD18-T simple载体并转化DH5a大肠杆菌.经蓝白斑筛选挑选白斑制备质粒,经双酶切、PCR及测序鉴定.结果成功克隆了RPO30基因,克隆的SSPV RPO30基因ORF 为585 bp,编码193个氨基酸,阅读框内有一个HindⅢ酶切位点,测序结果与GenBank数据库中不同痘病毒毒株之间同源性存在着明显区别.进一步经过生物学软件分析表明RPO30蛋白质氨基酸4-12、18-26、50-161、68-92,176-190位之间区域形成活性中心的可能性较大,选择这些区域进行作用可能会造成该基因产物酶的失活,从而高效抑制病毒的复制.
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