【摘 要】
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目的为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体。方法根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核
【机 构】
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深圳市坪山区人民医院中心实验室,广西师范大学生命科学学院,中国人民解放军第九二四医院中心实验室,深圳市人民医院临床医学研究中心
【基金项目】
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坪山区卫生系统科研项目(201801),深圳市卫生计生系统科研项目(201601065),深圳市科技计划项目(JCYJ20180305163846927),广西自然科学基金项目(2015GXNSFBA139176)
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目的为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体。方法根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养。结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNACRISPR-Cas
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