目的:建立一种稳定、经济、简单的牛肾上腺髓质嗜铬细胞体外分离、纯化方法,为临床移植提供充足、健康的细胞来源。方法:实验于2004-01/2005-12在中科院大连化学物理研究所生物医学材料工程组实验室完成。将胶原酶消化法和机械分离法结合,分离新生牛嗜铬细胞;采用Percoll非连续密度梯度离心法纯化新生牛嗜铬细胞。采用相差显微镜观察牛嗜铬细胞形态,椎虫蓝排斥染色观察牛嗜铬细胞活性,组织化学染色鉴定牛嗜铬细胞属性和纯度,免疫组化染色观察牛嗜铬细胞的功能活性。结果:①健康的牛嗜铬细胞集中在一定密度的两层分离介质之间,红细胞完全沉降于离心管底部,而皮质细胞和细胞碎屑则分散在特定密度的分离介质中。②平均每个牛肾上腺可分离得到(0.7～3.1)×108个牛嗜铬细胞。③将分离得到的牛嗜铬细胞进行椎虫蓝排斥染色,显示新鲜分离的牛嗜铬细胞存活率大于99%,具有合成儿茶酚胺的功能活性。结论:机械分离结合胶原酶灌注消化法分离牛嗜铬细胞后,经Percoll非连续等密度梯度离心可以有效纯化牛嗜铬细胞,分离的细胞数量多,纯度高,有合成儿茶酚胺的功能活性。