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【分类号】：R286
【摘要】 目的 建立安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定方法。方法 采用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，检测波长是202 nm，流速是1 mL·min-1，柱温是30 ℃。结果 盐酸水苏碱在5.625～28.125 μg内有良好的线性关系，r=0.9992，回收率为100.3%，RSD为2.4%。结论 本法专属性强，准确、简便，可为安坤益母草片的质量标准提供依据。
【关键词】 安坤益母草片；高效液相色谱法；盐酸水苏碱
安坤益母草片是由作者经由安坤益母草膏改剂型而得，由益母草、川芎、白芍、地黄、当归等药材组成。具有养经调血、化淤生新的功效，临床上主要用于血淤气滞引起的月经不调、行经腹痛、量少色暗、产后淤血不净等症，取得满意效果。益母草是方中君药，盐酸水苏碱是有效成分之一，其测定方法有雷氏盐沉淀溶解比色法、紫外分光光度法、薄層扫描法、HPLC法等。为更好地控制制剂质量，确保临床疗效，本文采用HPLC法测定盐酸水苏碱的含量，结果表明方法专属性强、精密度高、分离度好，可用于控制安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定。
1 仪器与试药 WATERS2695-2996型高效液相色谱仪（美国）。安坤益母草片（自制）；盐酸水苏碱对照品（批号：712-9903，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：氨基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），大连依利特公司；流动相：乙腈-水（体积比78∶22）；流速：1 mL·min-1；检测波长：202 nm；柱温：30 ℃；进样量：15 μL。在此条件下，供试品中盐酸水苏碱峰能达到基线分离，理论板数按盐酸水苏碱峰计应不低于4 000，分离度均是3.6。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸水苏碱对照品11.25 mg置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，得到1.125 mg/mL的盐酸水苏碱对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品5片（0.25 g/片），除去薄膜衣，研细，精密称取0.25 g，置具塞锥形瓶中，精密加入20 mL乙醇，超声处理30 min，滤过，滤渣及容器用20 mL乙醇分次洗涤，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至10 mL的量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心（5 000 r/min，5 min），取上清液作为供试品溶液。
2.2.3 盐酸水苏碱空白供试液的制备 按处方称取除益母草外的药材提取，取处方比例辅料，按安坤益母草片制备工艺制得安坤益母草空白片，再按“2.2.2”项下制备方法制得空白对照供试液。
2.3 标准曲线的制备 精密量取盐酸水苏碱对照品溶液（1.125 mg/mL） 5、7、10、15、20、25 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定盐酸水苏碱色谱峰面积，以盐酸水苏碱微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=5.89×104x-1.52×104 （r=0.9992），线性范围：5.625～28.125 μg。
2.4 干扰试验 按“2.1”色谱条件，取盐酸水苏碱对照品溶液、供试品溶液、空白供试液，分别注入液相色谱仪，结果表明供试品色谱在与对照品色谱相应位置上，有一相同的色谱峰，而空白供试液在此保留时间内不出峰，表明其他成分对测定盐酸水苏碱无干扰。
2.5 精密度试验 取对照品溶液（1.125 mg/mL） 15 μL，重复进样6次，记录盐酸水苏碱的峰面积。结果盐酸水苏碱峰面积RSD=0.8%。
2.6 稳定性试验 取上述供试品溶液15 μL，分别在0、2、4、8、16、24 h进样，记录盐酸水苏碱的峰面积，结果盐酸水苏碱峰面积的RSD=1.2%（n=6），表明供试品溶液在制备后24 h内测定基本稳定。
2.7 重复性试验 取同一批安坤益母草片（批号：20070412）6份，按“2.2.2”项方法处理样品并测定盐酸水苏碱峰面积，计算盐酸水苏碱含量，结果RSD=1.7%，表明此方法测定盐酸水苏碱含量重复性好。
2.8 加样回收试验 精密称取已知含量的样品（批号20070406，盐酸水苏碱含量10.8 mg/片）6份，每份取样量为供试品取样量（0.25 g/片）的50%，按“2.2.2”项方法操作，以当前取样含量的1∶1，分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液（1.08 mg/mL）5 mL，制备加样回收供试品溶液，按含量测定条件测定，计算回收率。
2.9 样品测定 取5批（批号20070510、20070513、20070520、20070517、20070519）10个样品，按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定。结果安坤益母草片盐酸水苏碱平均含量是10.33 mg/片。
3 讨论 盐酸水苏碱结构中既含有碱性的NH4+，又含有酸性的COOH-，分子量小，极性大，在常规的C18柱中难保留。以常规的生物碱分析方法很难将盐酸水苏碱分离，最后参考文献改用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，在此条件下，盐酸水苏碱不仅能得到较好的保留，而且与其他峰完全分离，分离度达到要求。
【参考文献】 [1] 徐履琴.用硫代氰酸铬铵剩余比色法测定益母草中生物碱[J].中草药，1985，（11）：7-8. [2] 杨雪萍，何召允.HPLC法测定安宫止血颗粒中盐酸水苏碱的含量[J].江西中医药，2007，38（2）：
【摘要】 目的 建立安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定方法。方法 采用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，检测波长是202 nm，流速是1 mL·min-1，柱温是30 ℃。结果 盐酸水苏碱在5.625～28.125 μg内有良好的线性关系，r=0.9992，回收率为100.3%，RSD为2.4%。结论 本法专属性强，准确、简便，可为安坤益母草片的质量标准提供依据。
【关键词】 安坤益母草片；高效液相色谱法；盐酸水苏碱
安坤益母草片是由作者经由安坤益母草膏改剂型而得，由益母草、川芎、白芍、地黄、当归等药材组成。具有养经调血、化淤生新的功效，临床上主要用于血淤气滞引起的月经不调、行经腹痛、量少色暗、产后淤血不净等症，取得满意效果。益母草是方中君药，盐酸水苏碱是有效成分之一，其测定方法有雷氏盐沉淀溶解比色法、紫外分光光度法、薄層扫描法、HPLC法等。为更好地控制制剂质量，确保临床疗效，本文采用HPLC法测定盐酸水苏碱的含量，结果表明方法专属性强、精密度高、分离度好，可用于控制安坤益母草片中盐酸水苏碱的含量测定。
1 仪器与试药 WATERS2695-2996型高效液相色谱仪（美国）。安坤益母草片（自制）；盐酸水苏碱对照品（批号：712-9903，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱：氨基柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），大连依利特公司；流动相：乙腈-水（体积比78∶22）；流速：1 mL·min-1；检测波长：202 nm；柱温：30 ℃；进样量：15 μL。在此条件下，供试品中盐酸水苏碱峰能达到基线分离，理论板数按盐酸水苏碱峰计应不低于4 000，分离度均是3.6。
2.2 溶液的配制
2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取盐酸水苏碱对照品11.25 mg置10 mL量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，得到1.125 mg/mL的盐酸水苏碱对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品5片（0.25 g/片），除去薄膜衣，研细，精密称取0.25 g，置具塞锥形瓶中，精密加入20 mL乙醇，超声处理30 min，滤过，滤渣及容器用20 mL乙醇分次洗涤，滤过，合并滤液，蒸干，残渣加乙醇溶解并转移至10 mL的量瓶中，加乙醇稀释至刻度，摇匀，离心（5 000 r/min，5 min），取上清液作为供试品溶液。
2.2.3 盐酸水苏碱空白供试液的制备 按处方称取除益母草外的药材提取，取处方比例辅料，按安坤益母草片制备工艺制得安坤益母草空白片，再按“2.2.2”项下制备方法制得空白对照供试液。
2.3 标准曲线的制备 精密量取盐酸水苏碱对照品溶液（1.125 mg/mL） 5、7、10、15、20、25 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定盐酸水苏碱色谱峰面积，以盐酸水苏碱微克数为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=5.89×104x-1.52×104 （r=0.9992），线性范围：5.625～28.125 μg。
2.4 干扰试验 按“2.1”色谱条件，取盐酸水苏碱对照品溶液、供试品溶液、空白供试液，分别注入液相色谱仪，结果表明供试品色谱在与对照品色谱相应位置上，有一相同的色谱峰，而空白供试液在此保留时间内不出峰，表明其他成分对测定盐酸水苏碱无干扰。
2.5 精密度试验 取对照品溶液（1.125 mg/mL） 15 μL，重复进样6次，记录盐酸水苏碱的峰面积。结果盐酸水苏碱峰面积RSD=0.8%。
2.6 稳定性试验 取上述供试品溶液15 μL，分别在0、2、4、8、16、24 h进样，记录盐酸水苏碱的峰面积，结果盐酸水苏碱峰面积的RSD=1.2%（n=6），表明供试品溶液在制备后24 h内测定基本稳定。
2.7 重复性试验 取同一批安坤益母草片（批号：20070412）6份，按“2.2.2”项方法处理样品并测定盐酸水苏碱峰面积，计算盐酸水苏碱含量，结果RSD=1.7%，表明此方法测定盐酸水苏碱含量重复性好。
2.8 加样回收试验 精密称取已知含量的样品（批号20070406，盐酸水苏碱含量10.8 mg/片）6份，每份取样量为供试品取样量（0.25 g/片）的50%，按“2.2.2”项方法操作，以当前取样含量的1∶1，分别精密加入盐酸水苏碱对照品溶液（1.08 mg/mL）5 mL，制备加样回收供试品溶液，按含量测定条件测定，计算回收率。
2.9 样品测定 取5批（批号20070510、20070513、20070520、20070517、20070519）10个样品，按“2.2.2”项方法制备供试品溶液，进样测定。结果安坤益母草片盐酸水苏碱平均含量是10.33 mg/片。
3 讨论 盐酸水苏碱结构中既含有碱性的NH4+，又含有酸性的COOH-，分子量小，极性大，在常规的C18柱中难保留。以常规的生物碱分析方法很难将盐酸水苏碱分离，最后参考文献改用氨基柱，以乙腈-水（体积比78∶22）为流动相，在此条件下，盐酸水苏碱不仅能得到较好的保留，而且与其他峰完全分离，分离度达到要求。
【参考文献】 [1] 徐履琴.用硫代氰酸铬铵剩余比色法测定益母草中生物碱[J].中草药，1985，（11）：7-8. [2] 杨雪萍，何召允.HPLC法测定安宫止血颗粒中盐酸水苏碱的含量[J].江西中医药，2007，38（2）：