【摘 要】
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目的 探讨-572C/G多态性位点对IL-6基因启动子与核提取物结合活性的影响,为预测疾病的发生发展提供参考.方法 将携带-572位点C等位基因型的IL-6基因启动子区(-1029～52bp)克隆到pGL3-Basic载体中,构建pGL3/-572C载体,采用定点突变试剂盒获得pGL3/-572G载体.将构建的IL-6启动子荧光素载体转染至HeLa细胞,利用双荧光素酶系统分析-572C/G基因多态性对启动子活性的影响.设计合成了,涵盖IL-6启动子区-572位点C/G基因型的单链互补寡核苷酸,并在3\
【机 构】
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南方科技大学第二附属医院,深圳市第三人民医院肺病三科,广东 深圳 518112;南方科技大学第二附属医院,深圳市第三人民医院肝病研究所,广东 深圳 518112
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目的 探讨-572C/G多态性位点对IL-6基因启动子与核提取物结合活性的影响,为预测疾病的发生发展提供参考.方法 将携带-572位点C等位基因型的IL-6基因启动子区(-1029～52bp)克隆到pGL3-Basic载体中,构建pGL3/-572C载体,采用定点突变试剂盒获得pGL3/-572G载体.将构建的IL-6启动子荧光素载体转染至HeLa细胞,利用双荧光素酶系统分析-572C/G基因多态性对启动子活性的影响.设计合成了,涵盖IL-6启动子区-572位点C/G基因型的单链互补寡核苷酸,并在3\'端进行生物素标记.然后退火形成双链寡核苷酸,之后与HeLa细胞核提取物孵育,用电泳迁移率实验(EMSA)分析IL-6基因-572 C/G多态性对核提取物结合活性的影响.结果 pGL3/-572C在HeLa细胞中的转录活性显著高于pGL3/-572G,差异有统计学意义(P<0.01);EMSA结果显示当核提取物与用生物素标记的C探针孵育后出现一条强迁移条带(复合物1)及一条超级迁移条带(复合物2),而G探针与核提取物孵育后仅出现一条弱迁移条带(复合物1),且用未标记生物素的C或G竞争探针进行竞争性结合,可以特异性抑制复合物1的形成,表明-572C等位基因突变能增加IL-6启动子与核蛋白的结合活性,使更多的核蛋白结合在IL-6启位置区域,形成起始转录复合物.结论 -572C/G多态性能影响IL-6启动子的转录活性,同时对IL-6启动子的核提取物结合活性具有调控作用.
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