【摘 要】
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目的 利用质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术,建立不依赖抗体的质谱定量检测蛋白的方法.方法 通过skyline软件选择β半乳糖苷酶(Beta-Galactosidase,BG)
【机 构】
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广西医科大学医学科学实验中心,教育部区域性高发肿瘤早期防治研究重点实验室,广西南宁530000;广西医科大学公共卫生学院
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目的 利用质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)技术,建立不依赖抗体的质谱定量检测蛋白的方法.方法 通过skyline软件选择β半乳糖苷酶(Beta-Galactosidase,BG)定量的肽段及母-子离子对并优化;通过5次重复实验计算方法的相对标准偏差RSD(％)(relative standard deviation,RSD);将BG加入到酵母提取物酶切产物中建立复杂背景下标准曲线.结果 在多次实验中反复被鉴定的可用于蛋白定量分析的BG 3个唯一肽段分别为:VDEDQPFPAVPK,IDPNAWVER,GDFQFNISR;5次重复实验MRM检测BG积分峰面积的RSD均小于6％;3个肽段在0～50×10-6fmol/L的浓度范围内线性相关良好,标准曲线R2值为0.99852～0.99955,3个肽段在浓度为0.625×106 fmol/L时依然可以检测到稳定的质谱峰,显示了方法的高灵敏度.结论 建立了MRM质谱相对定量检测BG的方法,为MRM质谱定量检测血清标志物奠定了基础.
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