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论文摘要： 目的 考察复方菊冰喷雾剂的急性毒性、局部刺激性以及蟾蜍口腔黏膜纤毛毒性。方法 采用最大给药量试验观察鼻腔给药后动物短期内出现的急性毒性反应，包括呼吸状况、行为活动、精神状态等；参照中药新药指导原则考察复方菊冰喷雾剂的局部刺激性，并对相关组织进行病理切片检查；在光学显微镜下观察在体、离体蟾蜍口腔上腭纤毛在药物溶液作用下的持续摆动时间，考察复方菊冰喷雾剂的纤毛毒性大小。结果 复方菊冰喷雾剂以最大给药浓度2.0 mL/kg给予大鼠双侧鼻腔滴鼻无明显的急性毒性反应出现；局部刺激性实验中动物一般状况良好，未发生全身反应及死亡情况；组织病理学检查未见异常；对在体和离体蟾蜍口腔黏膜上腭纤毛的功能有一定的损伤作用。结论 复方菊冰喷雾剂无明显急性毒性、局部刺激性，但有抑制蟾蜍口腔黏膜纤毛摆动的作用。
主题词：复方菊冰喷雾剂 急性毒性
中图分类号：S859.82
中药鼻腔给药方式历史悠久，具有独特的优点。其中喷雾剂是通过雾化装置借助压缩空气产生的动力使药液雾化并喷入鼻中，从而激发经气，疏通经络，促进气血运行，调节脏腑功能，发挥局部或全身性作用，达到预防及治疗疾病的一种疗法。复方菊冰喷雾剂是由广东药学院药物研究所研制的用于治疗偏头痛的中药复方，已完成的药效学试验证实其对偏头痛具有显著的治疗作用，本文旨在考察其经鼻给药的毒性情况。
一、材料与方法
1、试剂与仪器
复方菊冰喷雾剂及基质溶液（广东药学院药物研究所提供）；鼻炎喷雾剂（佛山顺众药业有限公司）；去氧胆酸钠（北京奥博星生物科技有限公司）。
EG1160石蜡包埋机、RM2255石蜡切片机（德国莱卡LEICA）；倒置光学显微镜（日本Olympus）；AE240电子分析天平（梅特勒托利多仪器有限公司）。
2、 实验动物
SD大鼠，SPF级，体质量（200±20） g，雌雄各半，广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK粤20080020；蟾蜍，普通级，体质量60～80 g，雌雄兼用，由市场购入。
3、 急性毒性试验
选取健康成年SD大鼠32只，随机分为空白组、溶剂组、复方菊冰喷雾剂组、阳性药鼻炎喷雾剂4组，每组8只。试验前禁食约12 h，复方菊冰噴雾剂组将复方菊冰喷雾剂以最大给药容积2.0 mL/kg给予大鼠双侧鼻腔滴鼻；溶剂组、阳性药物组同法给予相同体积对照溶液，正常对照组不作任何处理。给药后常规饲养7 d，详细观察给药后4 h内大鼠的反应情况，包括大鼠的外观、行为活动、精神状态、体质量变化、中毒反应的起始时间、严重程度等，对于濒死及死亡动物行大体解剖，若出现异常则对改变器官行组织病理学检查。
4 、局部刺激性试验
取SD大白鼠32只，随机分成4组，每组8只。复方菊冰喷雾剂组将复方菊冰喷雾剂以给药容积0.1 μL/kg给予大鼠双侧鼻腔滴鼻，若动物抵抗性强或药物渗漏，可给予数分钟间隔使其性情缓和，鼻孔微张后再给药，以保证药液与鼻腔及呼吸道黏膜接触达到4 h以上；溶剂组、阳性药物组同法给予相同体积对照溶液；正常对照组不作任何处理。每天给药3次，连续给药7 d，常规饲养。末次给药后24 h，每组分别处死4只动物，其余各组动物分别观察至停药后48 h（各组处死2只动物）、停药后7 d（各组处死2只动物），观察动物全身状况、局部刺激症状及呼吸道局部黏膜的变化。
5 、口腔黏膜纤毛毒性试验
对在体蟾蜍口腔黏膜纤毛运动的影响
将蟾蜍仰卧固定，用止血钳牵拉，使口腔张开，于上腭黏膜处滴加药液0.5 mL，使药液完全浸没上腭，接触30 min后，用生理盐水洗净药物，用眼科手术剪分离蟾蜍两眼之间的黏膜，用生理盐水洗净血块及杂物，轻轻盖上盖玻片，光学显微镜下观察纤毛运动情况，随后置于加有少量蒸馏水的层析缸中，密闭，使水蒸气近饱和状态。每隔适当时间取出，显微镜观察。如纤毛继续运动，则放回层析缸，直到纤毛停止运动。记录从开始给药到纤毛完全停止运动所需要的时间，并观察蟾蜍鼻黏膜的变化情况。另取蟾蜍如上操作，滴加生理盐水0.5 mL作为阴性对照。以文献公认的具有纤毛毒性的10 g/L 去氧胆酸钠作为阳性对照，并计算纤毛持续运动时间相对百分率，相对百分率越高，药物的纤毛毒性越小。
6 、统计学处理
所有数据均用 SPSS 11.0软件分析，实验数据用均数±标准差（±s）表示，组间的均数比较用方差分析，P<0.05为差异有显著性。
二、结果
1 、急性毒性试验
给药后溶剂组、复方菊冰喷雾剂组大鼠均出现活动状态下降、精神不振、并有闭眼、口腔流痰等症状；阳性药鼻炎滴剂组大鼠活动力也出现降低，但较前两组精神状态好，安静但没有出现闭眼，5 h后各组均陆续恢复正常。空白组、溶剂组、复方菊冰喷雾剂组、阳性药鼻炎喷雾剂组于给药后3 h先后开始进食。7 d内各组大鼠外观体征、呼吸频率均未见异常，毛色光泽、行为活动如常，摄食、饮水、粪便等亦未发现异常，其体质量增加百分率经统计学检验差异无显著性 （P>0.05）。
2、 局部刺激性试验
一般情况观察： 给药后溶剂组、复方菊冰喷雾剂组大鼠均出现挠鼻、打喷嚏、甩头等症状，其中后者的挠鼻现象较为频繁；阳性药鼻炎滴剂组也出现挠鼻症状，但频率较低。连续7 d鼻腔给药期间，各组大鼠外观体征、行为活动、呼吸状况未见异常，未见哮喘、呕吐、窒息等局部刺激反应。鼻腔未见异常分泌物，粪便状况无异常，无1例死亡。各组大鼠体质量及其体质量增加百分率经统计学检验差异无显著性 （P>0.05） 。
组织病理学检查：实验后将大鼠的鼠鼻、喉、气管等呼吸道黏膜进行病理学切片检查，各组均未见明显的损伤变化及大量炎细胞浸润，与正常组比较，差异无显著性，表明复方菊冰喷雾剂鼻腔局部用药无明显刺激性，其临床使用比较安全。有关组织病理学照片见图1。
3 、口腔黏膜纤毛毒性试验
1）对在体蟾蜍口腔黏膜纤毛运动的影响
与生理盐水组相比，给药复方菊冰喷雾剂后，接触药物期间蟾蜍出现剧烈挣扎，上腭黏膜变红且有皱纹样的血丝。纤毛的摆动时间也非常短，与生理盐水比较差异有非常显著性，结合病理学切片推断可能与药物的浓度太大有关。
生理盐水组纤毛摆动的时间很长，具有纤毛毒作用的1%（ρ）去氧胆酸钠纤毛摆动时间则很小，而复方菊冰喷雾剂组和鼻炎滴剂组也有非常显著的抑制蟾蜍纤毛摆动的作用。
2） 对离体蟾蜍口腔黏膜纤毛运动的影响
与生理盐水比较，复方菊冰具有比较显著的抑制蟾蜍口腔黏膜纤毛摆动的作用。
三、讨论
鼻腔给药由来已久，随着药物制剂新技术和新辅料的发展，其不仅可治疗鼻腔局部疾病，而且可通过鼻腔给药发挥全身作用。鼻腔给药能避免胃肠道降解和肝脏首过效应，因此具有生物利用度高、起效快、患者顺应性好等特点。研究发现[8]，通过鼻腔给药可增加药物在脑组织中的分布，可用于治疗中枢神经系统疾病。近年来，鼻黏膜喷雾剂的研究呈迅速上升趋势，其优点是喷出的雾滴较细，在鼻腔内分布均匀、不易流失、吸收快、生物利用度高。
鼻腔喷雾剂的急性毒性、局部刺激性以及蟾蜍口腔黏膜纤毛毒性是新药临床前安全性评价的重要组成部分。鼻腔给药存在的最大问题是其对鼻黏膜纤毛的毒性，轻度的刺激可能导致鼻炎，损伤内鼻，严重时还会造成出血、鼻窦炎、鼻中隔穿透、嗅觉丧失等[9]。
本研究证实，复方菊冰喷雾剂无明显的急性毒性、局部刺激性，但蟾蜍口腔黏膜纤毛毒性试验结果显示其具有明显的抑制蟾蜍纤毛摆动的毒副作用，在对复方菊冰喷雾剂成分进行拆分毒性试验中也存在相同的抑制作用，初步推测推测可能是由于药物的黏度较高引起的，此外还可能与给药间隔时间、连续用药次数、药物在黏膜上蓄积等有一定的关系，具体的影响因素有待进一步研究。
参考文献
1、唐晓峰，何伟，王晖，刘文彬，复方菊冰喷雾剂的毒性试验研究，论文网，2010.09
主题词：复方菊冰喷雾剂 急性毒性
中图分类号：S859.82
中药鼻腔给药方式历史悠久，具有独特的优点。其中喷雾剂是通过雾化装置借助压缩空气产生的动力使药液雾化并喷入鼻中，从而激发经气，疏通经络，促进气血运行，调节脏腑功能，发挥局部或全身性作用，达到预防及治疗疾病的一种疗法。复方菊冰喷雾剂是由广东药学院药物研究所研制的用于治疗偏头痛的中药复方，已完成的药效学试验证实其对偏头痛具有显著的治疗作用，本文旨在考察其经鼻给药的毒性情况。
一、材料与方法
1、试剂与仪器
复方菊冰喷雾剂及基质溶液（广东药学院药物研究所提供）；鼻炎喷雾剂（佛山顺众药业有限公司）；去氧胆酸钠（北京奥博星生物科技有限公司）。
EG1160石蜡包埋机、RM2255石蜡切片机（德国莱卡LEICA）；倒置光学显微镜（日本Olympus）；AE240电子分析天平（梅特勒托利多仪器有限公司）。
2、 实验动物
SD大鼠，SPF级，体质量（200±20） g，雌雄各半，广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK粤20080020；蟾蜍，普通级，体质量60～80 g，雌雄兼用，由市场购入。
3、 急性毒性试验
选取健康成年SD大鼠32只，随机分为空白组、溶剂组、复方菊冰喷雾剂组、阳性药鼻炎喷雾剂4组，每组8只。试验前禁食约12 h，复方菊冰噴雾剂组将复方菊冰喷雾剂以最大给药容积2.0 mL/kg给予大鼠双侧鼻腔滴鼻；溶剂组、阳性药物组同法给予相同体积对照溶液，正常对照组不作任何处理。给药后常规饲养7 d，详细观察给药后4 h内大鼠的反应情况，包括大鼠的外观、行为活动、精神状态、体质量变化、中毒反应的起始时间、严重程度等，对于濒死及死亡动物行大体解剖，若出现异常则对改变器官行组织病理学检查。
4 、局部刺激性试验
取SD大白鼠32只，随机分成4组，每组8只。复方菊冰喷雾剂组将复方菊冰喷雾剂以给药容积0.1 μL/kg给予大鼠双侧鼻腔滴鼻，若动物抵抗性强或药物渗漏，可给予数分钟间隔使其性情缓和，鼻孔微张后再给药，以保证药液与鼻腔及呼吸道黏膜接触达到4 h以上；溶剂组、阳性药物组同法给予相同体积对照溶液；正常对照组不作任何处理。每天给药3次，连续给药7 d，常规饲养。末次给药后24 h，每组分别处死4只动物，其余各组动物分别观察至停药后48 h（各组处死2只动物）、停药后7 d（各组处死2只动物），观察动物全身状况、局部刺激症状及呼吸道局部黏膜的变化。
5 、口腔黏膜纤毛毒性试验
对在体蟾蜍口腔黏膜纤毛运动的影响
将蟾蜍仰卧固定，用止血钳牵拉，使口腔张开，于上腭黏膜处滴加药液0.5 mL，使药液完全浸没上腭，接触30 min后，用生理盐水洗净药物，用眼科手术剪分离蟾蜍两眼之间的黏膜，用生理盐水洗净血块及杂物，轻轻盖上盖玻片，光学显微镜下观察纤毛运动情况，随后置于加有少量蒸馏水的层析缸中，密闭，使水蒸气近饱和状态。每隔适当时间取出，显微镜观察。如纤毛继续运动，则放回层析缸，直到纤毛停止运动。记录从开始给药到纤毛完全停止运动所需要的时间，并观察蟾蜍鼻黏膜的变化情况。另取蟾蜍如上操作，滴加生理盐水0.5 mL作为阴性对照。以文献公认的具有纤毛毒性的10 g/L 去氧胆酸钠作为阳性对照，并计算纤毛持续运动时间相对百分率，相对百分率越高，药物的纤毛毒性越小。
6 、统计学处理
所有数据均用 SPSS 11.0软件分析，实验数据用均数±标准差（±s）表示，组间的均数比较用方差分析，P<0.05为差异有显著性。
二、结果
1 、急性毒性试验
给药后溶剂组、复方菊冰喷雾剂组大鼠均出现活动状态下降、精神不振、并有闭眼、口腔流痰等症状；阳性药鼻炎滴剂组大鼠活动力也出现降低，但较前两组精神状态好，安静但没有出现闭眼，5 h后各组均陆续恢复正常。空白组、溶剂组、复方菊冰喷雾剂组、阳性药鼻炎喷雾剂组于给药后3 h先后开始进食。7 d内各组大鼠外观体征、呼吸频率均未见异常，毛色光泽、行为活动如常，摄食、饮水、粪便等亦未发现异常，其体质量增加百分率经统计学检验差异无显著性 （P>0.05）。
2、 局部刺激性试验
一般情况观察： 给药后溶剂组、复方菊冰喷雾剂组大鼠均出现挠鼻、打喷嚏、甩头等症状，其中后者的挠鼻现象较为频繁；阳性药鼻炎滴剂组也出现挠鼻症状，但频率较低。连续7 d鼻腔给药期间，各组大鼠外观体征、行为活动、呼吸状况未见异常，未见哮喘、呕吐、窒息等局部刺激反应。鼻腔未见异常分泌物，粪便状况无异常，无1例死亡。各组大鼠体质量及其体质量增加百分率经统计学检验差异无显著性 （P>0.05） 。
组织病理学检查：实验后将大鼠的鼠鼻、喉、气管等呼吸道黏膜进行病理学切片检查，各组均未见明显的损伤变化及大量炎细胞浸润，与正常组比较，差异无显著性，表明复方菊冰喷雾剂鼻腔局部用药无明显刺激性，其临床使用比较安全。有关组织病理学照片见图1。
3 、口腔黏膜纤毛毒性试验
1）对在体蟾蜍口腔黏膜纤毛运动的影响
与生理盐水组相比，给药复方菊冰喷雾剂后，接触药物期间蟾蜍出现剧烈挣扎，上腭黏膜变红且有皱纹样的血丝。纤毛的摆动时间也非常短，与生理盐水比较差异有非常显著性，结合病理学切片推断可能与药物的浓度太大有关。
生理盐水组纤毛摆动的时间很长，具有纤毛毒作用的1%（ρ）去氧胆酸钠纤毛摆动时间则很小，而复方菊冰喷雾剂组和鼻炎滴剂组也有非常显著的抑制蟾蜍纤毛摆动的作用。
2） 对离体蟾蜍口腔黏膜纤毛运动的影响
与生理盐水比较，复方菊冰具有比较显著的抑制蟾蜍口腔黏膜纤毛摆动的作用。
三、讨论
鼻腔给药由来已久，随着药物制剂新技术和新辅料的发展，其不仅可治疗鼻腔局部疾病，而且可通过鼻腔给药发挥全身作用。鼻腔给药能避免胃肠道降解和肝脏首过效应，因此具有生物利用度高、起效快、患者顺应性好等特点。研究发现[8]，通过鼻腔给药可增加药物在脑组织中的分布，可用于治疗中枢神经系统疾病。近年来，鼻黏膜喷雾剂的研究呈迅速上升趋势，其优点是喷出的雾滴较细，在鼻腔内分布均匀、不易流失、吸收快、生物利用度高。
鼻腔喷雾剂的急性毒性、局部刺激性以及蟾蜍口腔黏膜纤毛毒性是新药临床前安全性评价的重要组成部分。鼻腔给药存在的最大问题是其对鼻黏膜纤毛的毒性，轻度的刺激可能导致鼻炎，损伤内鼻，严重时还会造成出血、鼻窦炎、鼻中隔穿透、嗅觉丧失等[9]。
本研究证实，复方菊冰喷雾剂无明显的急性毒性、局部刺激性，但蟾蜍口腔黏膜纤毛毒性试验结果显示其具有明显的抑制蟾蜍纤毛摆动的毒副作用，在对复方菊冰喷雾剂成分进行拆分毒性试验中也存在相同的抑制作用，初步推测推测可能是由于药物的黏度较高引起的，此外还可能与给药间隔时间、连续用药次数、药物在黏膜上蓄积等有一定的关系，具体的影响因素有待进一步研究。
参考文献
1、唐晓峰，何伟，王晖，刘文彬，复方菊冰喷雾剂的毒性试验研究，论文网，2010.09