检测肝硬化脾功能亢进大鼠脾脏组织中辅助性T细胞1型(Th1型)趋化因子受体蛋白CXCR3、CCR5和辅助性T细胞2型(Th2型)趋化因子受体蛋白CCR3的表达及Th1/ Th2淋巴细胞亚群平衡状态。

采用实验研究方法。将46只雄性SD纯系大鼠，分为脾功能亢进组(36只)和对照组(10只)。脾功能亢进组大鼠采用40%CCl₄花生油溶液灌胃，每周2次，每次3. 0 mL/ kg, 15％白酒作为饮用水，共8周制作脾功能亢进大鼠模型。对照组大鼠正常饮食。肉眼观察大鼠形态变化，经HE染色、 Masson染色，行肝功能检查及血常规验证肝硬化脾功能亢进模型建立成功后，免疫组织化学染色和Western blot检测两组大鼠脾脏趋化因子受体蛋白CXCR3、CCR5、CCR3的表达。正态分布的计量资料以

±s表示，两组间的比较采用独立样本t检验。

脾功能亢进组大鼠毛色暗淡并且掉毛严重，食欲不佳，活动量较少，精神萎靡，建模第5周开始，大鼠陆续出现死亡，剩余19只。对照组大鼠毛发色光泽正常，食欲佳，精神状态良好，对外界刺激敏感，活动量正常。肝脏病理形态学变化：脾功能亢进组大鼠肝组织内可见纤维增粗紊乱，肝组织的正常结构被破坏，纤维束分割肝小叶，破坏的肝小叶和部分增生的肝细胞团被较粗的纤维分割包绕，假小叶形成，肝细胞排列紊乱，弥漫散在脂肪细胞，异形细胞，细胞核增大，甚至有多核细胞。对照组大鼠肝组织未见上述变化。脾脏病理形态学变化：脾功能亢进组大鼠脾脏略显肿胀，血管内皮增厚明显，血管内皮增生，红髓扩大，大部分白髓消失，中央动脉管壁存在不同程度的增厚以及管壁的纤维化，脾窦扩张。对照组大鼠脾脏组织未见上述变化。肝功能变化：脾功能亢进组大鼠肝功能ALT和AST水平分别为(264±111) U/ L、(687±299)U/ L，明显高于正常对照组的(27±8) U/ L、(124±20)U/ L，两组比较，差异有统计学意义( t＝5. 64, 4. 98， P<0. 05)；脾功能亢进组大鼠TP水平为(54±8)g/ L，低于对照组的(65±3)g/ L，两组比较，差异有统计学意义( t＝－3. 35， P<0. 05)。外周血细胞计数变化：脾功能亢进组大鼠WBC计数为(23. 9±5. 0)×10⁹／L，高于对照组大鼠的(6. 2±2. 4)×10⁹／L，两组比较，差异有统计学意义( t＝3.50， P<0. 05)；脾功能亢进组大鼠RBC、PLT计数分别为(6. 3±0. 7)×10¹²／L、(418±124)×10⁹／L，低于对照组的(8. 0±0. 6)×10¹²／L、(1 109±161)× 10⁹／L，两组比较，差异有统计学意义( t＝－2. 28 ， －4. 92， P<0. 05)。免疫组织化学染色检测结果：CXCR3、CCR5、CCR3阳性表现为细胞膜和(或)细胞质染成黄色、棕色或棕褐色。脾功能亢进组大鼠CXCR3和CCR5的吸光度A值分别为(81. 7±24. 4)× 10^－3、(3. 6±1. 3)×10^－3，高于对照组的(19. 2±5. 8)×10^－3、(1.2±0. 4)×10^－3，两组比较，差异有统计学意义( t ＝16. 22, 9. 09， P <0. 05)；脾功能亢进组CCR3的吸光度A值为(8.8±3. 7)× 10^－3，对照组为(7.9±2. 8)×10^－3，两组比较，差异无统计学意义( t＝0. 87， P>0. 05)。脾功能亢进组大鼠CXCR3、CCR5阳性细胞率分别为52%±9%、19%±5%，高于对照组21%±5%、10%±3%，两组比较，差异有统计学意义( t＝ 17. 31, 8. 21， P<0. 05)，脾功能亢进组与对照组大鼠CCR3阳性细胞率分别为35%±9%、33%±14%，两组比较，差异无统计学意义( t＝0. 43， P>0.05)。Western blot检测结果：脾功能亢进组大鼠CXCR3和CCR5蛋白的相对表达量分别为2. 45±0. 85、0. 94±0. 48，高于对照组的1. 31±0. 95、0.32±0. 26，两组比较，差异有统计学意义( t＝2. 62, 2. 91， P<0. 05)，而脾功能亢进组大鼠CCR3蛋白的相对表达量为0. 47±0. 27，低于对照组的0. 92±0. 67，两组比较，差异有统计学意义( t＝－2. 18， P<0. 05)。

CCl₄致肝硬化脾功能亢进大鼠脾脏中趋化因子受体蛋白异常表达，提示Th1/ Th2淋巴细胞亚群已失衡，可能参与了外周血细胞减少的调控。