论文部分内容阅读
背景与目的 内脂素是一种来源于内脏脂肪的新脂肪因子,具有复杂的生物学功能,除具有类似胰岛素的降血糖效应外,还可能作为炎症介质参与体内炎症反应.大量证据表明内脂素可能在心脑血管疾病、糖尿病、代谢综合征和肾脏疾病等动脉粥样硬化性疾病中发挥着重要作用,这与内脂素影响斑块稳定性、血管炎症及糖脂代谢等作用密切相关.近年来,研究认为它可能是一个替在危险因素参与了内皮功能紊乱的发生.然而,内脂素对血管内皮功能的影响非常复杂,到目前为止,一直没有直接证据证实内脂素能导致动脉内皮损伤及其作用机制.本研究从内皮细胞间连接角度出发,拟观察内脂素对人脐静脉内皮细胞通透性及缝隙连接蛋白Connexin37(Cx37)、Connexin40 (Cx40)和Connexin43(Cx43)表达的影响及初步探讨其可能机制.方法 将HUVEC12细胞以5×104/孔的密度种板,经不同浓度(0、1、10、100 nmol/L)和不同时间(0、3、6、12、24h)内脂素处理,或预先Wortmannin(50 nmol/L)、U0126 (50 μmol/L)、SB203580 (50 μmol/L)等抑制剂孵育3h.运用实时荧光定量PCR和Western blot分别检测Cx37、Cx40和Cx43 mRNA与蛋白水平的变化,并采用Transwell system检测单层内皮细胞通透性的改变.结果 内脂素处理内皮细胞对Cx37、Cx40 mRNA表达无影响,但Cx37、Cx40蛋白的表达随着内脂素浓度的增高和时间的延长而减少,呈一定剂量、时间依赖性.然而,内脂素能呈剂量、时间依赖性上调Cx43 mRNA和蛋白的表达.通透性实验结果显示,随着内脂素浓度的增加及处理时间的延长,内皮细胞致密单层的通透性逐渐增大,且该作用呈剂量和时间依赖性.此外,Wortmannin特异性抑制磷酸肌醇3激酶(PI3K)活性后,能明显逆转内脂素诱导的Cx43蛋白表达,但对Cx43的mRNA表达无影响.U0126特异性抑制ERK1/2活性或SB203580特异性抑制p38MAPK活性则均能明显下调内脂素诱导的Cx43 mRNA及蛋白表达.结论 内脂素可下调内皮细胞Cx37、Cx40蛋白表达,上调Cx43的表达；内脂素可增加内皮细胞的通透性,且呈时间、剂量依赖性；PI3K、ERK1/2及p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)经不同方式介导内脂素诱导HUVEC-12内皮细胞Cx43的表达.