巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立

来源 :中华医学检验杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hzq5157585
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目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期(IE)基因mRNA。方法设计合成跨越HCMVIE基因内含子区的一对引物,分别用RTPCR和PCR技术扩增HCMVmRNA和DNA,用Southern杂交鉴定阳性产物。结果HCMVIE基因mRNA表达在感染后6小时即可出现,并持续到感染后至少96小时,RTPCR检测的最低敏感性为100fg总RNA,其他病毒和细胞RNA不能被扩增。结论RTPCR技术检测HCMVmRNA敏感、特异,有望应用于临床作为HCMV活动性感染的早期诊断方法 Objective To establish a rapid and convenient reverse transcription-polymerase chain reaction (RTPCR) method for the detection of immediate cytomegalovirus (HCMV) mRNA in early stage (IE). Methods A pair of primers were designed and synthesized to cross HCMVIE gene intron region. HCMV mRNA and DNA were amplified by RT-PCR and PCR, respectively. The positive products were identified by Southern blotting. Results HCMVIE gene mRNA expression appeared 6 hours after infection and lasted at least 96 hours after infection. The lowest sensitivity of RT-PCR detection was 100 fg total RNA, and the other viruses and cell RNAs could not be amplified. Conclusion RTPCR detection HCMVmRNA sensitive and specific, is expected to be used as an early clinical diagnosis of HCMV infection
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