为了优化多年生黑麦草愈伤组织诱导培养条件,以多年生黑麦草成熟种子为材料,研究浸泡、研磨和接种方式等因素对愈伤组织诱导率和出愈时间的影响,以及不同浓度的柠檬酸对其愈伤组织褐化的抑制效果。结果显示,浸泡48h处理有利于种子愈伤组织诱导,随着浸泡时间延长,愈伤组织诱导率逐渐下降,且出愈时间推迟。在浸泡48h处理下,研磨处理的种子愈伤组织诱导率显著高于未研磨处理的种子,随机接种的种子愈伤组织诱导率显著高于机械接种的种子;经研磨处理的种子以随机接种方式接种于愈伤组织诱导培养基上,培养3d后即出现愈伤组织,14~21d后愈伤组织发生达到高峰期,21~30d后胚性愈伤组织大量形成,愈伤组织诱导率高达90%。此外,研究表明,在愈伤组织的继代培养中,对愈伤组织褐化抑制效果较好的柠檬酸浓度是2mg·L-1,培养2周的褐化率为15%,而随柠檬酸浓度升高,褐化率逐渐增加,而未添加柠檬酸的愈伤褐化率为50%。经试验观察发现2mg·L-1柠檬酸对愈伤组织的增殖和分化再生无明显影响,胚性愈伤组织分化率为70%,生根率100%。本研究建立的多年生黑麦草的高效再生体系,不仅有利于其基因工程改造,也为其愈伤组织再生体系研究奠定了科学基础。