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摘要：目的：探讨建立控制胃泰胶囊质量的方法。方法：采用薄层色谱法（TLC）对川芎、当归和赤芍药材进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）对牡荆苷进行含量测定。结果：TLC特征斑点明显清晰、专属性强。牡荆苷在0.0576～0.2880 μg（r=0.9998）间具有良好的线性关系，平均回收率分别为99.73%（RSD=2.1%，n=6）。结论：所建标准适用于胃泰胶囊的质量控制。
关键词：胃泰胶囊；质量；薄层色谱；高效液相色谱法
Abstract：Objective：To establish the quality standard Yuanhao Weitai Capsule.Methods：Thin—Layer chromatography（TLC）was employed for the qualitative determination of Chuanxiong Rhizoma、Angelicae Sinensis Radix and Paeoniae Radix RubraHigh performance liquid chromatography（HPLC） was applied for the determination of Vitexin in Weitai Capsule.Results：The characteristic by TLC was obvious and highly specific.The Linear range of Vitexin ranged from 0.0576～0.2880μg （r=0.9998）.The average recovery was 99.73%（RSD=2.1%，n=6）respectively.Conclusion：The established standard can be used for the quality control of Yuanhao Weitai Capsule.
Keywords：Yuanhao Weitai Capsule；Quality standards；TLC；HPLC
胃泰胶囊是由当归、生地、赤芍、川芎、木豆叶5味药组成，具有行气活血，清热燥湿，和胃止痛，消炎理气功效。用于肝肾气滞，湿热瘀阻所引起的急慢性胃肠炎，胃及十二指肠溃疡等。为了有效控制其质量，建立了该制剂的质量方法。采用TLC法对方中臣药川芎、当归和赤芍进行定性鉴别。采用HPLC对方中君药木豆叶进行含量测定研究。
1 仪器与试药
岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪（岛津LC-10Atvp HPLC Pump，岛津SPD-10Avp/10AVvp紫外检测器，N2000色谱工作站）；METTLER TOLEDO EL204-IC电子分析天平； KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；川芎对照药材（批号：120918—201206）、赤芍对照药材（批号：121093—201202）、芍药苷对照品（批号：110736—201223） （中国药品生物制品检定所）、当归对照药材（批号：927—201110）、牡荆苷对照品（批号：111687—201301） （中国药品生物制品检定所）；高效液相中使用的甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
2.1川芎和当归的薄层色谱鉴别
取本品内容物5g，加乙醚30ml，超声处理15分钟，加活性炭适量摇匀（使溶液至近无色），滤过，滤液挥干，残渣加乙醚乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取除去川芎、当归按处方和工艺制得的阴性对照品，同法制成阴性对照溶液。再取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，分别加乙醚10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚乙酯0.5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述四种溶液各6～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照溶液无此斑点。
图1川芎和当归的TLC
1—3供试品 4—5川芎、当归阴性对照 6当归对照药材 7川芎对照药材
2.2赤芍的薄层色谱鉴别
取本品内容物2.5g，加蒸馏水25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，以正丁醇饱和的水洗涤2次，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取除去赤芍按处方和工艺制得的阴性对照品，同法制成阴性对照溶液。另取赤芍对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声提取20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1nl使溶解，作为对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
图2 赤芍的TLC
1—3供试品 4阴性对照 5芍药苷对照品 6赤芍对照药材
3 牡荆苷的含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：KromasiL C 18柱（4.6 mm x250 mm，5 um）；流动相：流动相：甲醇—1%醋酸 梯度洗脱 具体如下：
表1 梯度洗脱程序
检测波长：339nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；理论板数按牡荆苷素峰计应不低于3000。 3.2 对照品溶液的制备
精密称取牡荆苷对照品1mg，置10ml容量瓶中，用甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含牡荆苷0.1mg）。
3.3 供试品溶液的制备
取本品内容物约2g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称重，超声处理40min，取出，放置至室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取木豆叶的阴性样品，研细，取0.5g，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。
3.4 干扰性试验
取对照品溶液、供试品溶液和缺木豆叶的阴性溶液、各进样20μL，进行分析，牡荆苷峰与杂质峰完全分离，而阴性对照在相同的位置上无色谱峰。见图3，图4和图5。
图3：对照品溶液
图4：供试品溶液
图5：缺木豆叶阴性对照
3.5 线性关系考察
精密称取牡荆苷对照品1.44mg，置100ml量瓶中，加甲醇超声使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，4ml，6ml，8ml，10ml，置10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别取20μl注入高效液相色谱仪中，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标绘制标准曲线。得牡荆苷回归方程y= 59784x+12350，r=0.9998。结果表明，牡荆苷在0.0576～0.2880μg范围内呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验
取对照品溶液，重复进样6次，每次20？L，牡荆苷峰面积值的RSD为0.98%，结果表明该仪器精密度良好。
3.7 重复性试验
取090301批胃泰胶囊样品20粒，照上述供试品溶液的制备方法，制得6份供试品溶液。分别精密吸取上述供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果平均含量为0.04654（mg/粒），RSD为0.57%。
3.8 稳定性试验
取胃泰胶囊样品20粒，照上述供试品的制备方法制得供试品溶液，分别于0、2、4、8、12小时精密吸取供试品20μl，注入液相色谱仪。结果表明：RSD=1.5%，说明样品在12小时内稳定性良好。
3.9 加样回收率试验
取胃泰胶囊样品20粒，倾出内容物，研细，分别精密称取6份样品粉末，各1.5g，分置6个100ml锥形瓶中，精密吸取浓度为0.144mg/ml的对照品溶液1ml至样品中，加甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。结果牡荆苷回收率为99.73%，RSD为2.1%，说明回收率良好。
3.10 样品测定
分别取3个批号样品各20粒，精密称定质量，制备供试品溶液，进样，测定，结果见表2。
表2 牡荆苷含量测定结果
结果表明：样品牡荆苷的含量符合规定。
4 讨论
4.1 结果表明，定性定量方法重现性好、简便、准确，能有效控制关节乐胶囊的质量。
4.2参照中国药典2010年一部薄层色谱法（附录Ⅵ B），经过多次实验摸索，先后参考了药典中川芎、当归、赤芍药材的鉴别方法及其它文献的鉴别方法，确定本品的薄层鉴别方法。
4.2 牡荆苷的含量测定方法，参照文献《岭南常用中药木豆叶中牡荆苷的HPLC含量测定》中木豆叶药材的含量测定方法来确定本品中木豆叶的含量测定方法。通过对流动相进行调整，使与干扰成分的分离度达到要求，试验证明本含量测定方法的加样回收率、精密度、线形和范围、专属性均良好。
参考文献：
[1].蒋万浪，石克，谢静. 八珍颗粒的薄层色谱鉴别. 药物鉴定. 2008年第17卷 第22期
[2].黄松，孙琳，赖小平. HPLC法测定不同产地及品种木豆叶中牡荆苷的含量 2011年1月 第34卷 第1期
[3].郝丽萍，刘秋燕，王太明. 活血复元胶囊的质量标准探讨. 中医研究 2OOO年1O月 第13卷 第5期
[4].阎向东，牛会芬，徐佳曦，白桂英，裴林. 天冰调督胶囊质量标准研究. 中成药 2007年4月 第29卷 第4期
[5].潘炎铃，陈斌. 天舒软胶囊质量标准的制定及研究. 人参研究 2005年第3期
[6].阮金兰， 赵钟祥， 曾庆忠， 钱忠明. 赤芍化学成分和药理作用的研究进展.
[7].郭允，赵春杰，洪博. 坎离砂中当归川芎的鉴别. 河南职工医学院学报 2011年 第23卷第2期
[8].沈丽娟，洪立湘，丁桂兰，耿红，商惠娟，张炜勋，迟景新. 血府逐瘀液的质量标准研究. 吉林中医药 1998年第6期
[9].李功营，唐红梅，丘振文. 岭南常用中药木豆叶中牡荆苷的HPLC含量测定. 中药新药与临床药理 2007年11月 第18卷 第6期
[10].曾彩芳，肖佳尚. HPLC法测定木豆叶中牡荆苷含量. 药品检验. 2009年
[11].高东藩，杨胜华. 赤芍及几种中成药中赤芍的薄层层析鉴别. 华西药学杂志. 1992年 第7卷 第4期
[12].徐先祥，刘青云，俞能高，葛少祥. 双波成薄层扫描测定赤芍总苷中赤芍甘含量. 时珍国医国药. 2001年第12卷 第1期
[13]. 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北京：化学工业出版社，2010
关键词：胃泰胶囊；质量；薄层色谱；高效液相色谱法
Abstract：Objective：To establish the quality standard Yuanhao Weitai Capsule.Methods：Thin—Layer chromatography（TLC）was employed for the qualitative determination of Chuanxiong Rhizoma、Angelicae Sinensis Radix and Paeoniae Radix RubraHigh performance liquid chromatography（HPLC） was applied for the determination of Vitexin in Weitai Capsule.Results：The characteristic by TLC was obvious and highly specific.The Linear range of Vitexin ranged from 0.0576～0.2880μg （r=0.9998）.The average recovery was 99.73%（RSD=2.1%，n=6）respectively.Conclusion：The established standard can be used for the quality control of Yuanhao Weitai Capsule.
Keywords：Yuanhao Weitai Capsule；Quality standards；TLC；HPLC
胃泰胶囊是由当归、生地、赤芍、川芎、木豆叶5味药组成，具有行气活血，清热燥湿，和胃止痛，消炎理气功效。用于肝肾气滞，湿热瘀阻所引起的急慢性胃肠炎，胃及十二指肠溃疡等。为了有效控制其质量，建立了该制剂的质量方法。采用TLC法对方中臣药川芎、当归和赤芍进行定性鉴别。采用HPLC对方中君药木豆叶进行含量测定研究。
1 仪器与试药
岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪（岛津LC-10Atvp HPLC Pump，岛津SPD-10Avp/10AVvp紫外检测器，N2000色谱工作站）；METTLER TOLEDO EL204-IC电子分析天平； KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；川芎对照药材（批号：120918—201206）、赤芍对照药材（批号：121093—201202）、芍药苷对照品（批号：110736—201223） （中国药品生物制品检定所）、当归对照药材（批号：927—201110）、牡荆苷对照品（批号：111687—201301） （中国药品生物制品检定所）；高效液相中使用的甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 薄层色谱鉴别
2.1川芎和当归的薄层色谱鉴别
取本品内容物5g，加乙醚30ml，超声处理15分钟，加活性炭适量摇匀（使溶液至近无色），滤过，滤液挥干，残渣加乙醚乙酯0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取除去川芎、当归按处方和工艺制得的阴性对照品，同法制成阴性对照溶液。再取川芎对照药材、当归对照药材各0.5g，分别加乙醚10ml，超声处理15分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醚乙酯0.5ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述四种溶液各6～10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷—乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯下（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性对照溶液无此斑点。
图1川芎和当归的TLC
1—3供试品 4—5川芎、当归阴性对照 6当归对照药材 7川芎对照药材
2.2赤芍的薄层色谱鉴别
取本品内容物2.5g，加蒸馏水25ml，超声处理20分钟，滤过，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，以正丁醇饱和的水洗涤2次，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取除去赤芍按处方和工艺制得的阴性对照品，同法制成阴性对照溶液。另取赤芍对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声提取20min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1nl使溶解，作为对照药材溶液。再取芍药苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录VI B）试验，吸取上述三种溶液各6μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇—甲酸（40：5：10：0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
图2 赤芍的TLC
1—3供试品 4阴性对照 5芍药苷对照品 6赤芍对照药材
3 牡荆苷的含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：KromasiL C 18柱（4.6 mm x250 mm，5 um）；流动相：流动相：甲醇—1%醋酸 梯度洗脱 具体如下：
表1 梯度洗脱程序
检测波长：339nm；流速：1.0 mL/min；柱温：室温；理论板数按牡荆苷素峰计应不低于3000。 3.2 对照品溶液的制备
精密称取牡荆苷对照品1mg，置10ml容量瓶中，用甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml中含牡荆苷0.1mg）。
3.3 供试品溶液的制备
取本品内容物约2g，精密称定，精密加入甲醇25ml，称重，超声处理40min，取出，放置至室温，用甲醇补足减失的重量，滤过，滤液作为供试品溶液。
另取木豆叶的阴性样品，研细，取0.5g，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。
3.4 干扰性试验
取对照品溶液、供试品溶液和缺木豆叶的阴性溶液、各进样20μL，进行分析，牡荆苷峰与杂质峰完全分离，而阴性对照在相同的位置上无色谱峰。见图3，图4和图5。
图3：对照品溶液
图4：供试品溶液
图5：缺木豆叶阴性对照
3.5 线性关系考察
精密称取牡荆苷对照品1.44mg，置100ml量瓶中，加甲醇超声使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，分别精密量取上述对照品溶液各2ml，4ml，6ml，8ml，10ml，置10ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，分别取20μl注入高效液相色谱仪中，记录色谱图。以峰面积为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标绘制标准曲线。得牡荆苷回归方程y= 59784x+12350，r=0.9998。结果表明，牡荆苷在0.0576～0.2880μg范围内呈良好的线性关系。
3.6 精密度试验
取对照品溶液，重复进样6次，每次20？L，牡荆苷峰面积值的RSD为0.98%，结果表明该仪器精密度良好。
3.7 重复性试验
取090301批胃泰胶囊样品20粒，照上述供试品溶液的制备方法，制得6份供试品溶液。分别精密吸取上述供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果平均含量为0.04654（mg/粒），RSD为0.57%。
3.8 稳定性试验
取胃泰胶囊样品20粒，照上述供试品的制备方法制得供试品溶液，分别于0、2、4、8、12小时精密吸取供试品20μl，注入液相色谱仪。结果表明：RSD=1.5%，说明样品在12小时内稳定性良好。
3.9 加样回收率试验
取胃泰胶囊样品20粒，倾出内容物，研细，分别精密称取6份样品粉末，各1.5g，分置6个100ml锥形瓶中，精密吸取浓度为0.144mg/ml的对照品溶液1ml至样品中，加甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理40分钟，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。结果牡荆苷回收率为99.73%，RSD为2.1%，说明回收率良好。
3.10 样品测定
分别取3个批号样品各20粒，精密称定质量，制备供试品溶液，进样，测定，结果见表2。
表2 牡荆苷含量测定结果
结果表明：样品牡荆苷的含量符合规定。
4 讨论
4.1 结果表明，定性定量方法重现性好、简便、准确，能有效控制关节乐胶囊的质量。
4.2参照中国药典2010年一部薄层色谱法（附录Ⅵ B），经过多次实验摸索，先后参考了药典中川芎、当归、赤芍药材的鉴别方法及其它文献的鉴别方法，确定本品的薄层鉴别方法。
4.2 牡荆苷的含量测定方法，参照文献《岭南常用中药木豆叶中牡荆苷的HPLC含量测定》中木豆叶药材的含量测定方法来确定本品中木豆叶的含量测定方法。通过对流动相进行调整，使与干扰成分的分离度达到要求，试验证明本含量测定方法的加样回收率、精密度、线形和范围、专属性均良好。
参考文献：
[1].蒋万浪，石克，谢静. 八珍颗粒的薄层色谱鉴别. 药物鉴定. 2008年第17卷 第22期
[2].黄松，孙琳，赖小平. HPLC法测定不同产地及品种木豆叶中牡荆苷的含量 2011年1月 第34卷 第1期
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[4].阎向东，牛会芬，徐佳曦，白桂英，裴林. 天冰调督胶囊质量标准研究. 中成药 2007年4月 第29卷 第4期
[5].潘炎铃，陈斌. 天舒软胶囊质量标准的制定及研究. 人参研究 2005年第3期
[6].阮金兰， 赵钟祥， 曾庆忠， 钱忠明. 赤芍化学成分和药理作用的研究进展.
[7].郭允，赵春杰，洪博. 坎离砂中当归川芎的鉴别. 河南职工医学院学报 2011年 第23卷第2期
[8].沈丽娟，洪立湘，丁桂兰，耿红，商惠娟，张炜勋，迟景新. 血府逐瘀液的质量标准研究. 吉林中医药 1998年第6期
[9].李功营，唐红梅，丘振文. 岭南常用中药木豆叶中牡荆苷的HPLC含量测定. 中药新药与临床药理 2007年11月 第18卷 第6期
[10].曾彩芳，肖佳尚. HPLC法测定木豆叶中牡荆苷含量. 药品检验. 2009年
[11].高东藩，杨胜华. 赤芍及几种中成药中赤芍的薄层层析鉴别. 华西药学杂志. 1992年 第7卷 第4期
[12].徐先祥，刘青云，俞能高，葛少祥. 双波成薄层扫描测定赤芍总苷中赤芍甘含量. 时珍国医国药. 2001年第12卷 第1期
[13]. 国家药典委员会.中华人民共和国药典.一部.北京：化学工业出版社，2010