【摘 要】
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目的：利用同尾酶技术构建pET15b-PEP-1-CAT重组质粒，为制备PEP-1-CAT融合蛋白进而为防治心肌缺血再灌注损伤奠定基础。方法：设计并合成两端分别带salⅠ和BglⅡ酶切位点的CAT引物
【机 构】
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郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所
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目的：利用同尾酶技术构建pET15b-PEP-1-CAT重组质粒，为制备PEP-1-CAT融合蛋白进而为防治心肌缺血再灌注损伤奠定基础。方法：设计并合成两端分别带salⅠ和BglⅡ酶切位点的CAT引物，用PCR方法以pZeoSV2（＋）-CAT质粒为模板，特异性扩增CAT全长cDNA。将扩增的CAT cDNA与dATP反应，利用TaqDNA聚合酶具有的非模板依赖性末端转移酶活性在CAT cDNA的3’末端加“A”并纯化，然后应用TA克隆策略将纯化后的CAT cDNA插入至中间载体pGEM-T Easy V
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