海芋过氧化氢酶的分离纯化及其性质

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为了探索海芋(Alocasia macrorrhiza)过氧化氢酶的分子结构和酶学性质,提取海芋新鲜叶片、叶柄和块茎的粗酶进行活力比较和同工酶分析。用Sephadex G 200凝胶过滤层析法将粗酶分离纯化,以PAGE电泳对酶纯度鉴定。结果表明:海芋过氧化氢酶较单一,没有同工酶。经层析法进行分离获得电泳纯的过氧化氢酶,其活力回收率为40.83%,纯化倍数为8.88倍。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)分析结果发现:该酶由5条肽链组成,全酶相对分子质量为2.621 1×105。酶学性质研究结果表明:该酶最适反应温度40℃,最适p H为7.5。在25~45℃和p H 6.0~9.0下,该酶能保持较强的催化活力,稳定性较好。在最适条件下,该酶的Km值为16.43mmol/L,对底物的亲和力较好。甲醇、乙醇和异丙醇对此酶活力有显著的抑制作用。
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