【摘 要】
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目的 检测微小核糖核酸（micro RNA, miR）-21在人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中的表达，并探讨miR-21对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 实时荧光定量PCR法（real-time fluorescent quantitative PCR, qRT-PCR）检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和
【机 构】
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内蒙古自治区巴彦淖尔市医院脊柱外科
【基金项目】
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内蒙古自治区自然科学基金项目（20190203MS1571）；
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目的 检测微小核糖核酸（micro RNA, miR）-21在人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中的表达，并探讨miR-21对骨肉瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。方法 实时荧光定量PCR法（real-time fluorescent quantitative PCR, qRT-PCR）检测人正常骨细胞hFOB1.19与人骨肉瘤细胞系U2OS,Saos-2和MG-63中miR-21的表达。选择MG-63细胞随机分为3组，利用脂质体2000分别转染空白对照（control）、阴性对照miR-21-NC及抑制剂组（miR-21-inhibitor），再通过qRT-PCR法验证转染后MG-63细胞中miR-21表达。CCK-8法检测MG-63细胞增殖能力变化；流式细胞技术检测抑制miR-21表达对MG-63细胞凋亡的影响；Transwell实验检测对MG-63细胞侵袭能力的影响以及采用Western blot检测抑制miR-21表达对MG-63细胞中PTEN,PI3K,AKT及p-AKT蛋白表达的影响。结果 人骨肉瘤细胞系Saos-2,U2OS和MG-63中miR-21相对表达水平分别为1.29±0.14,1.75±0.21和2.12±0.25，较人正常骨细胞hFOB 1.19中miR-21表达水平（0.75±0.12）显著升高，差异具有统计学意义（F=38.037,P=0.002）。转染抑制剂培养48h后，与Control组miR-21表达水平（2.07±0.28）和miR-21-NC组miR-21表达水平（2.02±0.33）相比，miR-21-inhibitor组miR-21表达水平（1.07±0.15）显著下降，差异具有统计学意义（F=33.357,P=0.005）。CCK-8结果表明，与Control组和miR-21-NC组相比，miR-21-inhibitor组各个时间点A值均显著下降，差异具有统计学意义（F=71.409～378.281，均P ＜0.001）。流式细胞检测结果表明，miR-21-inhibitor组凋亡数占比为45.0%，较Control组（8.65%）和miR-21-NC组（10.60%）均有增加，差异有统计学意义（F=56.134,P＜0.001）。Transwell实验结果显示，miR-21-inhibitor组细胞穿膜数（102±9个）较Control组细胞穿膜数（189±12个）及miR-21-NC组细胞穿膜数（177±16个）明显减少，差异有统计学意义（F=158.781,F＜0.001）。Western blot结果表明，miR-21-inhibitor组PTEN表达上调，PI3K和p-AKT表达下调，差异均有统计学意义（F=86.309～138.615，均P ＜0.001），但对AKT蛋白表达无明显影响，差异无统计学意义（F=14.527,P=0.152）。结论 miR-21在人骨肉瘤细胞系中呈高表达，抑制mi R-21表达可以抑制骨肉瘤细胞增殖和侵袭，促进其凋亡，作用机制可能与PTEN/PI3K/AKT通路有关。
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