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摘要 目的：研究黄芩中药外观性状与内在成分的相关性。方法：饮片的质量取决于传统的经验，如外观，颜色，质地，大小和气味，再通过高效液相色谱法测定饮片中黄芩苷的含量判定饮片质量，比较2种方法：常规经验鉴定的判断结果和HPLC测定结果的一致性。结果：常规经验鉴定的判断和HPLC测定结果相同。结论：利用传统经验，识别中药黄芩质量的方法既方便又可靠。
关键词 黄芩;传统经验鉴别;高效液相色谱法;表里关系;饮片
Abstract Objective：To study the relationship of external properties and internal components of Radix Scutellariae.Methods：The quality of decoction pieces was determined by traditional experience though the appearance，color，texture，size，smell and so on.Then the content of baicalin was determined by high performance liquid chromatography（HPLC），which also determined the quality of decoction pieces.The 2 methods were compared to find the consistency of results from traditional experience identification and HLPC.Results：There was conformance in the metheds of both traditional experience identification and HPLC.Conclusion：Traditional experience identification is convenient and reliable for determination of the quality of Radix Scutellariae.
Key Words Radix Scutellariae; Traditional experience identification; HPLC; Relationship of exterior and interior; Decoction pieces
中图分类号：R284.1文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.08.015
黄芩根入于药物，具有治疗下焦湿热，清除痛肿疔毒的作用，能解除胎动不安、胎漏下血、防止流产。主治肺内郁热、肺气失宣等症，湿热腹泻，发热，烦躁干渴，黄疸，热淋，疮疡肿胀，双目赤红，胎动不安等。《神农本草经》将其记录，并把黄芩列为中品。苏颂曰：“今川蜀河东（今山西）、陕西近郡皆有之，苗长尺余，茎干粗如筋，叶从地四面作丛生，类紫草，高一尺许，亦有独茎者，叶细长，青色，两两相对。再参照“潞州黄芩”（今山西长治县）图看来，山西、山东、陕西的黄芩和“耀州黄芩”（今陕西境）、“潞州黄芩”都可能是黄芩，与现实主流商品来源相符合。
2010版《中华人民共和国药典》黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根[1]。春、秋二季采挖，将泥和砂砾去除，选择向阳、通风、干燥处晾晒，撞下的根尖和细侧根单独收藏，晒干。野生黄芩外形与圆锥相似，整个植株呈现扭曲状，长8～25 cm，直径1～3 cm。外表显棕黄色或深黄色，有不稠密的疣状细小根痕，上部略有粗糙，有扭曲的纵皱纹或不规则的网纹，下部有顺纹和小细皱纹。质地十分坚硬并且脆，易被将其折断，折断后的断面显黄色，中心为红棕色;老根中心呈现干枯状或腐朽状或中空状，颜色为暗棕色或黑棕色。气微，味苦。栽培品与野生品种比较细长，大多数有分枝。外表皮显浅黄棕色，外皮紧贴，纵皱纹较细腻。断面黄色或浅黄色，质地与角质类似。味微苦[2-4]。但是现今黄芩野生枯芩价格高，含量较栽培品低，故本文研究只针对栽培品。黄芩饮片含黄芩苷（C21H18O11）不得低于8.0%。传统经验鉴别与HPLC测定这2个不同试验的结果比较可发现，2种检测结果一致，由此可得出传统经验中药鉴别方法具有可靠性、便捷性，在日常验收中药材的工作中可采用此方法，使其验收工作更加快速、可靠、简便、准确。
1 仪器与试药
1.1 仪器 AG-135电子天平0.01 mg（瑞士梅特勒电子天平AG135）;Waters2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）;超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司，型号：SK3300LH）;AL-204電子天平0.1 mg（梅特勒-托利多仪器有限公司）;流水式粉碎机（中国瑞安市环球药械厂，型号：DYQ-188）;Direct-QTM5超纯水仪（MilliPore）;可控温型电热套（山东甄城华鲁电热仪器厂，型号：KDM型）。
1.2 分析样品 黄芩苷对照品（批号：110715-201016，中国食品药品检定研究院）;黄芩15批（批号分别为：131103-1、131112-1、131120-1、131124-1、131129-1、140205-1、140214-1、140302-1、140316-1、140327-1、141010-1、141022-1、141104-1、141128-1、141207-1）来自新奇康药业股份有限公司提供;甲醇、乙腈均为由美国Fisher试剂公司提供的色谱纯;其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 传统经验鉴别 黄芩验收标准1）颜色棕黄色为5分，淡黄色3分，黄绿色1分;2）直径1～0.8 cm为5分，0.8～0.4 cm为3分，0.4～0.2 cm为1分;3）断面颜色显现为棕黄色为5分，断面显现为淡黄色3分、黄绿色1分;4）非药用部位为1分。10%以上判为不合格，非药用部位过多为劣药既为不合格;5）0～10分为不合格，11～15分为合格[5-7]。黄芩15批样品由新疆维吾尔自治区中医医院药学部李延升主任中药师通过观察黄芩药材表面的色泽和质地，以及断面面色泽、断面的品质鉴别了中药饮片的质量优劣，综合分析得出其中4批黄芩药材（批号分别为：131120-1、140214-1、140302-1、140327-1）为不合格药材。见表1。 2.2 HPLC法测定药材含量[8-10]
2.2.1 色谱条件 黄芩苷：高效液相色谱法，参照《中华人民共和国药典》。系统适宜性与色谱条件测试：填料选自十八烷基硅烷键合硅胶;甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）为流动相;检测波长设定280 nm。黄芩苷峰的理论塔板数不应小于2 500。
2.2.2 对照品溶液的制备 在60 ℃减压干燥4 h，得到一定量的黄芩苷对照品，通过精密称重，加入甲醇（色谱纯），制成每1 mL含120 μg的溶液，即可得到对照品溶液。
2.2.3 样品溶液的制备 取约0.3 g样品粉末（过筛3），准确称重之后，加40 mL 70%乙醇，称重，加热回流3 h，在室内冷却过后再次称重，若重量减少，则应补至回流前的重量，摇匀，滤过，将得到的滤液转至100 mL量瓶中，用少量乙醇（70%）洗涤容器，并且用少量乙醇（70%）溶解残渣，洗液滤过后置入同一量瓶中，加乙醇（70%）定容至校准线，并摇匀。准确量取1 mL置10 mL量瓶中，将甲醇加至定容刻度后摇晃均匀，即可得到对照品溶液。
2.2.4 检测方法 精密量取10 μL对照品溶液及10 μL供试品溶液，在“2.2.1”项色谱条件下检测，可得结果。本样品黄芩苷（C21H18O11）的含量不得少于8.0%。
2.2.5 專属性试验 精密吸取相同供试品的溶液，每2 h，可进样品1次，每次进样品10 μL，连续性的考察12 h。结果得黄芩苷RSD=1.34%（n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.2.6 线性关系考察 依次精密量取“2.2.1”项下黄芩苷标准品溶液各2、4、6、8、10 mL加入到10 mL量瓶中，并选择试剂甲醇精密定容至刻度并且将其摇匀，此时可得到一系列黄芩苷标准溶液。依次进样，记录色谱图1，横坐标对应对照溶液浓度（C，μg/mL），纵坐标对应峰面积（A），作图，得黄芩苷的回归方程分别为：Y=3.559 8×10-5X-6.443 1（r=0.999 9），结果可以表明，在24～120 μg黄芩苷范围内，黄芩苷及其峰面积呈良好的线性关系。
2.2.7 中间精密度试验 选择“2.2.1”项下相同质量浓度的对照品溶液，连续5次进样，测定。黄芩苷峰面积的RSD=1.06%（n=5），表明仪器精密度良好。
2.2.8 重复性试验 取样，依2.2.1项下方法准备样品溶液，平行制备5份，并进行测量。结果黄芩苷RSD=1.71%（n=5）。
2.2.9 回收率试验 精密吸取已知含量的样品9份，每份均为1 mL，分别精密加入黄芩苷对照品，依法测定并计算回收率结果测得的黄芩苷平均回收率为99.34%。见表2。取“2.2”项下确定测试溶液的已知含量，并添加不同量的黄芩苷参比溶液，准备成高浓度、中浓度和低浓度的各3份样品，按“2.2”项下色谱条件进行含量测定，计算其回收率。见表2。
2.2.10 样品测定结果 根据《中华人民共和国药典》2010年版，黄芩的含量测定方法，分别测定上述15批黄芩的黄芩苷含量，确定药材是否符合药用标准，结果4批（批号分别为：131120-1、140214-1、140327-1、141022-1、141104-1）不合格。见表3。
15批黄芩中显示，其中有4批黄芩属于未达标药品，测定结果显示均为黄芩中的黄芩苷含量较低，未达到《中华人民共和国药典》中所记载黄芩中黄芩苷的含量要求。而这4批被检测判定为不合格的药材批次与定性鉴别判定不合格的4批药材批次吻合。实验结果说明，在平时工作中对于中药饮片的验收可以利用传统经验鉴别的可靠性和准确性来进行判定是否合格。
2.3 统计学分析
2.3.1 2种鉴别方法的比较 将高效液相色谱法的结果与传统经验鉴别结果的数据进行比较，响应面统计公式用于用于拟合内容方程。见表4。
2.3.2 利用经验拟合黄芩苷含量方程 Y=-0.057 376+0.009*表面颜色+0.003 717 1*直径+0.015 084 9*断面颜色+0.056 403 4*非药用部位;R2=0.645 545，R2S=0.503 763，F=4.553 1，P=0.023 7。结果表明，采用传统经验鉴别黄芩质量与借助现代仪器鉴别黄芩质量具有较好的相关性。
3 讨论
通过对药材进行含量测定和定性鉴别2种不同的方法的比较，被检测和鉴别的15批黄芩药材的质量合格与否，说明含量测定与定性鉴别在中药材质量判定方面存在表里关系。黄芩从外表颜色看主要棕黄色。黄芩粗细主要会影响黄芩苷，黄芩粗黄芩苷合格，太细不容易合格。黄芩色泽为棕黄色容易合格，太细颜色为淡黄色不易合格。因此，批号黄芩131120-1、140214-1、140302-1、140327-1的黄芩直径较小颜色淡黄色，黄芩不合格，从而初步印证了黄芩质量的表里关系。
现今，许多部门选择借助电子鼻、电子眼和利用味觉传感器等采集的数据来研究中药材和饮片的形态特征与内在质量的关联性[4]，然而，中药材和饮片由矿物药、植物药和动物药构成，使用电子仪器检测中药材质量也处于摸索阶段，并且仪器价格较高，容易使其失去效能。因此，需要传承传统经验鉴别，实验的结果说明用传统经验来鉴别中药材质量是可靠、快速、简便、准确的，该方法可用于日常中药的验收。
参考文献
[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：化学工业出版社，2010：90.
[2]谢宗万.中药品种理论与应用[S].北京：人民卫生出版社，2008：202.
[3]中国药品生物制品检定所，广东省药品检定所编.中国中药材真伪鉴别图典（2）[S].广州：广东科技出版社，2007：49.
[4]李兵，张志勇.几种常见中药饮片掺伪、掺杂鉴别及快速检验[J].中国药业，2010，19（18）：78-79.
[5]沈建华.常见中药饮片掺假的鉴别[J].内蒙古中医药，2010，29（12）：47-48.
[6]邹广珍.几种中药饮片掺伪鉴别[J].实用中医药杂志，2009，25（12）：839-839.
[7]丁维毅，傅光煜，赵莲芳，等.常见中药饮片中伪充品的鉴别[J].中国中药杂志，2001，26（9）：641.
[8]潘鹏飞，孙菲，李延雪.HPLC法同时测定黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量[J].中国药师，2012，15（1）：75-77.
[9]苏健，向东，张赟华，等.HPLC测定滇黄芩中黄芩苷的含量[J].华西药学杂志，2005，20（4）：356-358.
[10]肖蓉，袁志芳，王春英，等.不同产地黄芩药材HPLC指纹图谱的研究[J].中草药，2005，36（5）：743-747.
（2018-11-26收稿 责任编辑：王明）
关键词 黄芩;传统经验鉴别;高效液相色谱法;表里关系;饮片
Abstract Objective：To study the relationship of external properties and internal components of Radix Scutellariae.Methods：The quality of decoction pieces was determined by traditional experience though the appearance，color，texture，size，smell and so on.Then the content of baicalin was determined by high performance liquid chromatography（HPLC），which also determined the quality of decoction pieces.The 2 methods were compared to find the consistency of results from traditional experience identification and HLPC.Results：There was conformance in the metheds of both traditional experience identification and HPLC.Conclusion：Traditional experience identification is convenient and reliable for determination of the quality of Radix Scutellariae.
Key Words Radix Scutellariae; Traditional experience identification; HPLC; Relationship of exterior and interior; Decoction pieces
中图分类号：R284.1文献标识码：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.08.015
黄芩根入于药物，具有治疗下焦湿热，清除痛肿疔毒的作用，能解除胎动不安、胎漏下血、防止流产。主治肺内郁热、肺气失宣等症，湿热腹泻，发热，烦躁干渴，黄疸，热淋，疮疡肿胀，双目赤红，胎动不安等。《神农本草经》将其记录，并把黄芩列为中品。苏颂曰：“今川蜀河东（今山西）、陕西近郡皆有之，苗长尺余，茎干粗如筋，叶从地四面作丛生，类紫草，高一尺许，亦有独茎者，叶细长，青色，两两相对。再参照“潞州黄芩”（今山西长治县）图看来，山西、山东、陕西的黄芩和“耀州黄芩”（今陕西境）、“潞州黄芩”都可能是黄芩，与现实主流商品来源相符合。
2010版《中华人民共和国药典》黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根[1]。春、秋二季采挖，将泥和砂砾去除，选择向阳、通风、干燥处晾晒，撞下的根尖和细侧根单独收藏，晒干。野生黄芩外形与圆锥相似，整个植株呈现扭曲状，长8～25 cm，直径1～3 cm。外表显棕黄色或深黄色，有不稠密的疣状细小根痕，上部略有粗糙，有扭曲的纵皱纹或不规则的网纹，下部有顺纹和小细皱纹。质地十分坚硬并且脆，易被将其折断，折断后的断面显黄色，中心为红棕色;老根中心呈现干枯状或腐朽状或中空状，颜色为暗棕色或黑棕色。气微，味苦。栽培品与野生品种比较细长，大多数有分枝。外表皮显浅黄棕色，外皮紧贴，纵皱纹较细腻。断面黄色或浅黄色，质地与角质类似。味微苦[2-4]。但是现今黄芩野生枯芩价格高，含量较栽培品低，故本文研究只针对栽培品。黄芩饮片含黄芩苷（C21H18O11）不得低于8.0%。传统经验鉴别与HPLC测定这2个不同试验的结果比较可发现，2种检测结果一致，由此可得出传统经验中药鉴别方法具有可靠性、便捷性，在日常验收中药材的工作中可采用此方法，使其验收工作更加快速、可靠、简便、准确。
1 仪器与试药
1.1 仪器 AG-135电子天平0.01 mg（瑞士梅特勒电子天平AG135）;Waters2695高效液相色谱仪（美国Waters公司）;超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司，型号：SK3300LH）;AL-204電子天平0.1 mg（梅特勒-托利多仪器有限公司）;流水式粉碎机（中国瑞安市环球药械厂，型号：DYQ-188）;Direct-QTM5超纯水仪（MilliPore）;可控温型电热套（山东甄城华鲁电热仪器厂，型号：KDM型）。
1.2 分析样品 黄芩苷对照品（批号：110715-201016，中国食品药品检定研究院）;黄芩15批（批号分别为：131103-1、131112-1、131120-1、131124-1、131129-1、140205-1、140214-1、140302-1、140316-1、140327-1、141010-1、141022-1、141104-1、141128-1、141207-1）来自新奇康药业股份有限公司提供;甲醇、乙腈均为由美国Fisher试剂公司提供的色谱纯;其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 传统经验鉴别 黄芩验收标准1）颜色棕黄色为5分，淡黄色3分，黄绿色1分;2）直径1～0.8 cm为5分，0.8～0.4 cm为3分，0.4～0.2 cm为1分;3）断面颜色显现为棕黄色为5分，断面显现为淡黄色3分、黄绿色1分;4）非药用部位为1分。10%以上判为不合格，非药用部位过多为劣药既为不合格;5）0～10分为不合格，11～15分为合格[5-7]。黄芩15批样品由新疆维吾尔自治区中医医院药学部李延升主任中药师通过观察黄芩药材表面的色泽和质地，以及断面面色泽、断面的品质鉴别了中药饮片的质量优劣，综合分析得出其中4批黄芩药材（批号分别为：131120-1、140214-1、140302-1、140327-1）为不合格药材。见表1。 2.2 HPLC法测定药材含量[8-10]
2.2.1 色谱条件 黄芩苷：高效液相色谱法，参照《中华人民共和国药典》。系统适宜性与色谱条件测试：填料选自十八烷基硅烷键合硅胶;甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）为流动相;检测波长设定280 nm。黄芩苷峰的理论塔板数不应小于2 500。
2.2.2 对照品溶液的制备 在60 ℃减压干燥4 h，得到一定量的黄芩苷对照品，通过精密称重，加入甲醇（色谱纯），制成每1 mL含120 μg的溶液，即可得到对照品溶液。
2.2.3 样品溶液的制备 取约0.3 g样品粉末（过筛3），准确称重之后，加40 mL 70%乙醇，称重，加热回流3 h，在室内冷却过后再次称重，若重量减少，则应补至回流前的重量，摇匀，滤过，将得到的滤液转至100 mL量瓶中，用少量乙醇（70%）洗涤容器，并且用少量乙醇（70%）溶解残渣，洗液滤过后置入同一量瓶中，加乙醇（70%）定容至校准线，并摇匀。准确量取1 mL置10 mL量瓶中，将甲醇加至定容刻度后摇晃均匀，即可得到对照品溶液。
2.2.4 检测方法 精密量取10 μL对照品溶液及10 μL供试品溶液，在“2.2.1”项色谱条件下检测，可得结果。本样品黄芩苷（C21H18O11）的含量不得少于8.0%。
2.2.5 專属性试验 精密吸取相同供试品的溶液，每2 h，可进样品1次，每次进样品10 μL，连续性的考察12 h。结果得黄芩苷RSD=1.34%（n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定。
2.2.6 线性关系考察 依次精密量取“2.2.1”项下黄芩苷标准品溶液各2、4、6、8、10 mL加入到10 mL量瓶中，并选择试剂甲醇精密定容至刻度并且将其摇匀，此时可得到一系列黄芩苷标准溶液。依次进样，记录色谱图1，横坐标对应对照溶液浓度（C，μg/mL），纵坐标对应峰面积（A），作图，得黄芩苷的回归方程分别为：Y=3.559 8×10-5X-6.443 1（r=0.999 9），结果可以表明，在24～120 μg黄芩苷范围内，黄芩苷及其峰面积呈良好的线性关系。
2.2.7 中间精密度试验 选择“2.2.1”项下相同质量浓度的对照品溶液，连续5次进样，测定。黄芩苷峰面积的RSD=1.06%（n=5），表明仪器精密度良好。
2.2.8 重复性试验 取样，依2.2.1项下方法准备样品溶液，平行制备5份，并进行测量。结果黄芩苷RSD=1.71%（n=5）。
2.2.9 回收率试验 精密吸取已知含量的样品9份，每份均为1 mL，分别精密加入黄芩苷对照品，依法测定并计算回收率结果测得的黄芩苷平均回收率为99.34%。见表2。取“2.2”项下确定测试溶液的已知含量，并添加不同量的黄芩苷参比溶液，准备成高浓度、中浓度和低浓度的各3份样品，按“2.2”项下色谱条件进行含量测定，计算其回收率。见表2。
2.2.10 样品测定结果 根据《中华人民共和国药典》2010年版，黄芩的含量测定方法，分别测定上述15批黄芩的黄芩苷含量，确定药材是否符合药用标准，结果4批（批号分别为：131120-1、140214-1、140327-1、141022-1、141104-1）不合格。见表3。
15批黄芩中显示，其中有4批黄芩属于未达标药品，测定结果显示均为黄芩中的黄芩苷含量较低，未达到《中华人民共和国药典》中所记载黄芩中黄芩苷的含量要求。而这4批被检测判定为不合格的药材批次与定性鉴别判定不合格的4批药材批次吻合。实验结果说明，在平时工作中对于中药饮片的验收可以利用传统经验鉴别的可靠性和准确性来进行判定是否合格。
2.3 统计学分析
2.3.1 2种鉴别方法的比较 将高效液相色谱法的结果与传统经验鉴别结果的数据进行比较，响应面统计公式用于用于拟合内容方程。见表4。
2.3.2 利用经验拟合黄芩苷含量方程 Y=-0.057 376+0.009*表面颜色+0.003 717 1*直径+0.015 084 9*断面颜色+0.056 403 4*非药用部位;R2=0.645 545，R2S=0.503 763，F=4.553 1，P=0.023 7。结果表明，采用传统经验鉴别黄芩质量与借助现代仪器鉴别黄芩质量具有较好的相关性。
3 讨论
通过对药材进行含量测定和定性鉴别2种不同的方法的比较，被检测和鉴别的15批黄芩药材的质量合格与否，说明含量测定与定性鉴别在中药材质量判定方面存在表里关系。黄芩从外表颜色看主要棕黄色。黄芩粗细主要会影响黄芩苷，黄芩粗黄芩苷合格，太细不容易合格。黄芩色泽为棕黄色容易合格，太细颜色为淡黄色不易合格。因此，批号黄芩131120-1、140214-1、140302-1、140327-1的黄芩直径较小颜色淡黄色，黄芩不合格，从而初步印证了黄芩质量的表里关系。
现今，许多部门选择借助电子鼻、电子眼和利用味觉传感器等采集的数据来研究中药材和饮片的形态特征与内在质量的关联性[4]，然而，中药材和饮片由矿物药、植物药和动物药构成，使用电子仪器检测中药材质量也处于摸索阶段，并且仪器价格较高，容易使其失去效能。因此，需要传承传统经验鉴别，实验的结果说明用传统经验来鉴别中药材质量是可靠、快速、简便、准确的，该方法可用于日常中药的验收。
参考文献
[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：化学工业出版社，2010：90.
[2]谢宗万.中药品种理论与应用[S].北京：人民卫生出版社，2008：202.
[3]中国药品生物制品检定所，广东省药品检定所编.中国中药材真伪鉴别图典（2）[S].广州：广东科技出版社，2007：49.
[4]李兵，张志勇.几种常见中药饮片掺伪、掺杂鉴别及快速检验[J].中国药业，2010，19（18）：78-79.
[5]沈建华.常见中药饮片掺假的鉴别[J].内蒙古中医药，2010，29（12）：47-48.
[6]邹广珍.几种中药饮片掺伪鉴别[J].实用中医药杂志，2009，25（12）：839-839.
[7]丁维毅，傅光煜，赵莲芳，等.常见中药饮片中伪充品的鉴别[J].中国中药杂志，2001，26（9）：641.
[8]潘鹏飞，孙菲，李延雪.HPLC法同时测定黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素的含量[J].中国药师，2012，15（1）：75-77.
[9]苏健，向东，张赟华，等.HPLC测定滇黄芩中黄芩苷的含量[J].华西药学杂志，2005，20（4）：356-358.
[10]肖蓉，袁志芳，王春英，等.不同产地黄芩药材HPLC指纹图谱的研究[J].中草药，2005，36（5）：743-747.
（2018-11-26收稿 责任编辑：王明）