论文部分内容阅读
背景与目的:肝细胞肝癌是一种临床上常见的恶性肿瘤,由于其对化疗药物的耐受,常导致预后较差。microRNA(miRNA,miR)是一类长链非编码小RNA,参与肿瘤的多种生物学功能。miR-27a-3p作为代谢相关的miRNA被广泛地研究,而与化疗敏感性之间关系的报道较少。通过探讨miR-27a-3p参与肝癌化疗敏感性及其可能机制,为肝癌化疗提供新的理论依据。方法:应用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库分析miR-27a-3p在肝细胞肝癌患者癌组织与癌旁组织中的表达。采用LipofectamineTM 3000脂质体瞬时转染方法,将miR-27a-3p过表达质粒和阴性对照质粒(miR-control)转染肝癌细胞株HepG2,将敲低质粒miR-inhibitor-27a-3p和阴性对照质粒(miR-inhibitor-control)转染PLC细胞,分别加入不同浓度的顺铂(cisplatin,DDP)处理48 h,采用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖情况;采用流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白[质]印迹法(Western blot)技术检测磷脂酰肌醇3激酶和蛋白激酶B(phosphoinosmde-3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路相关的蛋白表达。结果:miR-27a-3p在肝癌组织中的表达明显低于癌旁组织(P<0.05);在HepG2过表达细胞中,MTT结果显示,实验组miR-27a+DDP细胞对DDP的半数抑制浓度(IC50)为(1.02±0.03)μg/mL,较对照组miR-control+DDP(1.27±0.08)μg/mL、空白对照组+DDP(1.73±0.08)μg/mL均降低(P<0.05);细胞凋亡分析结果显示,实验组miR-27a+DDP的凋亡率[(31.03±0.20)%]显著高于对照组+DDP[(18.51±2.96)%]和空白对照组+DDP[(8.73±1.58)%](P<0.05);Western blot检测结果显示,miR-27a+DDP组的PI3K表达水平(0.28±0.01)较DDP组[(0.43±0.01)]、miR-27a组(0.57±0.11)及miR-control组(0.72±0.01)降低(P<0.05);miR-27a+DDP组的p-AKT的表达水平(0.29±0.01)与DDP组(0.46±0.05)、miR-27a组(0.67±0.01)及miR-control组(0.10±0.01)相比明显降低(P<0.05);而miR-27a+DDP组的C-caspase的表达水平(0.69±0.01)则高于DDP组(0.51±0.01)、miR-27a组(0.35±0.01)及miR-control组(0.18±0.01),差异有统计学意义(P<0.05)。进一步将miR-27a-3p在PLC细胞中敲低,并于DDP中刺激培养,MTT、细胞凋亡和Western blot实验结果显示,与HepG2过表达细胞的结果趋势相反,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-27a-3p可能通过调节PI3K/AKT信号通路调控肝癌细胞株对DDP的化疗敏感性,有望成为增强肝癌DDP化疗敏感性的潜在治疗靶点。