为了建立一种能同时检测GI型诺如病毒（GI-NV）、GII型诺如病毒（GII-NV）和A群轮状病毒（A-RV）的三重荧光定量PCR检测方法，本试验根据GI-NV和GII-NV的开放阅读框1（Orf1）与开放阅读框2（Orf2）基因之间保守序列、A-RV的非结构蛋白3（Nsp3）基因保守序列，分别设计合成3对特异性引物和3个TaqMan探针，人工合成含有目标序列的基因，制备重组质粒标准品，绘制标准曲线，并对该检测方法的特异性、灵敏度、重复性进行评估。同时通过检测收集的109份动物源食品样品，对建立的方法与商品化试剂盒进行检测比对。结果显示：该方法可以特异性地区分GI-NV、GII-NV和A-RV,而与其他病原无交叉反应；该方法的最低检出限均为1×10~2copies/μL的质粒标准品，具有较高的敏感性；组内和组间重复性试验结果显示，变异系数均小于5%,重复性较好；该方法与商品化的试剂盒检测结果符合率为100%。结果表明，本试验建立的检测方法能够快速、准确区分GI-NV、GII-NV和A-RV。