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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP9蛋白单克隆抗体制备与鉴定

来源 :东北农业大学学报 | 被引量 : 3次 | 上传用户：pp

【摘 要】

：

根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌

【作 者】

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赵孟孟 张二芹 冯松林 郭依嘉 阮海宇 王文佳 邢星 张桂红 

【机 构】

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华南农业大学兽医学院,河南农业大学牧医工程学院,河南牧业经济学院制药工程学院,广西钦州保税港区出入境检验检疫局

【出 处】

：

东北农业大学学报

【发表日期】

：

2016年04期

【关键词】

：

猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP9 单克隆抗体 杂交瘤 PRRSV  NSP9  monocional antibodies  hybridoma 

【基金项目】

：

国家自然科学基金项目（31272564）,公益性行业（农业）科研专项（201203039）,国家生猪现代农业产业技术体系项目（CARS-36）

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根据NSP9非结构蛋白参数选取相应30 bp DNA片段,片段串联后人工合成并连接p ET-28a(+)载体,大肠杆菌BL21中表达得到可溶蛋白,镍柱亲和层析纯化后免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞骨髓瘤细胞融合。细胞融合后利用间接ELISA法杂交瘤细胞阳性克隆筛选,2次亚克隆后共获得3株抗PRRSV NSP9单克隆抗体,命名为3B17、3J13、3F19。这3株单抗可与大肠杆菌表达的蛋白产物和PRRSV感染的Marc-145细胞发生特异性反应。在PRRSV感染的Marc-145细

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