【摘 要】
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植物螯合肽合成酶(phytochelatin synthase,PCS)催化谷胱甘肽(glutathione,GSH)合成植物螯合肽(phytochelatins,PCs),在植物重金属解毒方面具有重要作用.苎麻(Boehmeria nivea) PCS1(命名为Bn-PCS1)主要在叶片中表达,镉胁迫下表达上调,但其参与苎麻耐受重金属的分子机制尚不明确.本实验对BnPCS1进行了生物信息学分析,构建了苎麻叶片均一化cDNA文库和诱饵载体pGBKT7-BnPCS1,利用酵母双杂交系统进行BnPCS1互作蛋
【机 构】
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湖南农业大学农学院,长沙410128
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植物螯合肽合成酶(phytochelatin synthase,PCS)催化谷胱甘肽(glutathione,GSH)合成植物螯合肽(phytochelatins,PCs),在植物重金属解毒方面具有重要作用.苎麻(Boehmeria nivea) PCS1(命名为Bn-PCS1)主要在叶片中表达,镉胁迫下表达上调,但其参与苎麻耐受重金属的分子机制尚不明确.本实验对BnPCS1进行了生物信息学分析,构建了苎麻叶片均一化cDNA文库和诱饵载体pGBKT7-BnPCS1,利用酵母双杂交系统进行BnPCS1互作蛋白的筛选.结果 显示苎麻BnPCS1是等电点为6.76的不稳定蛋白质和亲水蛋白质,亚细胞定位预测结果表明BnPCS1位于细胞质.苎麻叶片均一化cDNA文库库容是7.12× 106 cfu,文库滴度是6.98×106 cfu·mL-1,均一化程度均大于106.将pGBKT7-BnPCS1诱饵载体转化至Y2HGold酵母菌株检测发现,其无毒性和自激活现象,通过构建的诱饵载体pGBKT7-BnPCS1与苎麻均一化cDNA文库杂交,鉴定出两个BnPCS1的互作蛋白,分别为伴侣蛋白ClpB3和前体mRNA加工因子39.这为进一步研究BnPCS1的功能及分子机制提供了参考依据.
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