【摘 要】
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目的 观察Survivin、FoxM1B的短发卡RNA对人脑胶质瘤干细胞生长和凋亡的影响.方法 培养脑胶质瘤干细胞;依据靶基因序列设计siRNA,建立可克隆入pSilencerTM3.1-H1neo表达载体
【机 构】
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徐州医学院附属医院神经外科,徐州医学院神经外科
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目的 观察Survivin、FoxM1B的短发卡RNA对人脑胶质瘤干细胞生长和凋亡的影响.方法 培养脑胶质瘤干细胞;依据靶基因序列设计siRNA,建立可克隆入pSilencerTM3.1-H1neo表达载体的Survivin和FoxM1B shRNA表达质粒系统,鉴定正确后扩增质粒;利用脂质体转染法(LipofectaminTM 2000)转染脑胶质瘤干细胞,分别采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot在mRNA和蛋白水平检测目的 基因的表达,并分别采用噻唑蓝(MTT)法和Hoechst染色试剂盒检测胶质瘤干细胞的生长抑制率及凋亡率.结果 成功构建Survivin、FoxM1B shRNA表达质粒;RT-PCR结果显示在第3、5、7天Survivin和FoxM1B的灰度值分别为80.27±11.65、77.41±10.99、78.10±8.84及72.45±9.59、70.50±9.43、67.94±13.57;Western blot检测Survivin和FoxM1B在第3、5、7天的灰度值分别为72.45±9.59、70.50±9.43、67.94±13.57及76.55±18.01、73.57±15.41、72.05±11.46.而细胞生长抑制率和凋亡率增加,双干扰组较单干扰组较为明显.结论 成功构建Survivin,FoxM1B shRNA表达质粒.shRNA转染脑胶质瘤干细胞后,目的 基因表达明显下降,从而抑制脑胶质瘤干细胞的增殖,促进凋亡.而双干扰效果更为显著.
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