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摘 要： 目的：本文通过建立高相液相色谱法对注射用左卡尼汀含量的测定，并对建立的方法进行方法学验证。方法：Agela XBP-C18色谱柱，检测波长：225nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：室温。结果：浓度在1.19～8.00mg/ml范围内，Y=144.43X+7.2867，r为0.9997，线性关系良好，中间精密度平均含量为100.9%，RSD为0.22%，重复性RSD为0.43%；平均回收率为100.10%，RSD为0.24%。结论 高效液相色谱法检测注射用左卡尼汀的含量具有简便、准确度高、重复性强等特点，值得推广应用使用此方法检测注射用左卡尼汀含量。
关键词： 高相液相色谱法；注射用左卡尼汀；含量测定
左卡尼汀是哺乳动物能量代谢的必需的体内天然物质，其主要功能是促进脂类代谢。它既能将长链脂肪酸带进线粒体基质，并促进脂类氧化分解，为人体内的细胞提供足够的能量，又能将其线粒体内产生的短链脂酰基输出。本品的补充可缓解其因体内缺乏引起的骨骼肌和心肌脂肪代谢紊乱等组织的功能障碍，且注射用左卡尼汀也未见不良反应，疗效较好，临床应用本品的患者较多[1]。因此为了临床用药安全，本文建立了注射用左卡尼汀的含量测定方法，能够准确的检测。
1.儀器与试药
1.1仪器
Agilent-1200型高效液相色谱仪. 紫外检测器； XS105DU电子天平：梅特勒公司
1.2试药
试剂：磷酸（分析纯）：哈尔滨化工化学试剂厂；甲醇（色谱纯）：SK Chemicals Ulsan
庚烷磺酸钠（色谱纯）：山东禹王实业有限公司化工分公司；水：注射用水。
对照品：来源：中国食品药品检定研究院，批号：101041-201503，纯度99.9%。
2.方法与结果
2.1色谱条件系统适用性
色谱柱：1、Agela XBP-C18，5μm， 4.6×250mm。流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸11.5ml，加1mol/L氢氧化钠溶液100ml，加水稀释至2000ml，用磷酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至2.4）-甲醇-庚烷磺酸钠（82ml：18ml：0.4g）。检测波长：225nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：室温
2.2测定法
精密称取本品适量，加水稀释制成加水溶解并制成每1ml中含左卡尼汀4mg的溶液，摇匀。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取左卡尼汀对照品适量，加水溶解并制成每1ml中含左卡尼汀4mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中左卡尼汀的含量[2]。
3.方法学验证
3.1 方法专属性试验
精密称取空白辅料和量取空白溶剂20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。在左卡尼汀主峰位置没有色谱峰出现，说明溶剂和空白辅料对含量测定无干扰。专属性较好。
3.2线性关系试验
精密称取左卡尼汀对照品（含量：99.9%）603.21mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0 ml、1.7 ml、3.0 ml、3.3 ml、5.0 ml、6.7ml，分别置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成系列线性溶液。分别吸取上述系列对照品溶液各20μl注入色谱仪，记录色谱图。
结果表明：左卡尼汀溶液浓度在1.19～8.00mg/ml范围内，Y=144.43X+7.2867，r为0.9997，线性关系良好，可满足含量测定的要求[3]。
3.3进样精密度试验
对照溶液配制：取对照品40.05mg，置10ml量瓶中，用流动相溶解并定量稀释至刻度，配成每1ml约含4mg的溶液。取上述对照品溶液，照上述色谱条件，连续进样6次。结果RSD为0.66%：本品含量测定方法精密度好。
3.4中间精密度试验
考察随机变动因素对精密度的影响，在同一实验室，不同日期、由不同分析人员、用不同实验设备测定结果之间的精密度。
取本品（批号：170629），照上述色谱条件，进行试验。计算中间精密度平均值及RSD 结果表明：有不同分析人员，在不同日期不同设备测得的左卡尼汀注射液平均含量为100.9%，RSD为0.22%，该试验符合测定要求。
3.5重复性试验
取本品（批号：170629）6份，分别用流动相稀释制成每1ml约含左卡尼汀4mg的溶液，分别摇匀，作为供试溶液，分别精密吸取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：RSD为0.43%，本品含量测定的重复性良好。
3.6回收率试验
分别精密称取左卡尼汀原料药（含量：98.96%）32.33mg、40.42mg、48.50mg，置于10ml量瓶中，制成含左卡尼汀分别为标示量的80%、100%、120%的供试品溶液，每个浓度各3份。另精密称取对照品约40mg，置于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。分别精密量取供试品溶液、对照品溶液各20μl，照上述色谱条件试验，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。由测得量与加入量的比值，即得回收率[4]。
结果表明：平均回收率为100.10%，RSD为0.24%，符合准确度试验要求。
3.7溶液稳定性试验
取本品（批号：170629），照上述色谱条件，室温放置，分别于0、1、2、4、6、8小时进样，试验结果：供试品溶液在8个小时内测定结果的相对标准偏差为0.28%，结果表明供试品溶液在室温放置8小时较稳定。
3.8样品含量测定
精密称取适量，用流动相稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液；另精密称取左卡尼汀对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。分别取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。左尼汀注射液样品3批及被仿制药，依法测定，三批供供试品及被仿制药的含量测定结果分别是：供试品：99.85%、100.22%、99.46%；被仿制药：98.77%。%结果表明：三批供试品及被仿制药含量均不少于90.0% [5]。
4.结论
通过对注射用左卡尼汀的含量测定方法学验证，结果：线性1.19～8.00mg/ml范围内呈良好的线性关系，且重复性、准确度、中间精密度较高，溶液在8小时能稳定。结果表明此方法能准确的测定注射用左卡尼汀的含量，因此该方法可行性较高。建议使用此方法测定注射用左卡尼汀的含量。
参考文献
[1]闵翠娥 陆媛 江少仪 谭胜连 HPLC法测定左卡尼汀注射液含量及有关物质 广东药学院学报 2009， 25（6）.
[2]高立军 王涛 全东琴高效液相色谱法测定左卡尼汀注射液的含量 科学技术与工程2011， 11（30）.
[3]李峰 高效液相色谱法用于左卡尼汀注射液的含量检测 中国基层医药 2010， 17（16）.
[4]袁彩君 朱天新高效液相色谱法测定左卡尼汀注射液的含量及杂质A 中国当代医药 2015， （19）.
[5] 耿银银 许丽晓 方会超 王莉 刘万卉 亲水作用色谱法测定左卡尼汀注射液含量及杂质A 烟台大学学报（自然科学与工程版） 2017， 30（3）.
关键词： 高相液相色谱法；注射用左卡尼汀；含量测定
左卡尼汀是哺乳动物能量代谢的必需的体内天然物质，其主要功能是促进脂类代谢。它既能将长链脂肪酸带进线粒体基质，并促进脂类氧化分解，为人体内的细胞提供足够的能量，又能将其线粒体内产生的短链脂酰基输出。本品的补充可缓解其因体内缺乏引起的骨骼肌和心肌脂肪代谢紊乱等组织的功能障碍，且注射用左卡尼汀也未见不良反应，疗效较好，临床应用本品的患者较多[1]。因此为了临床用药安全，本文建立了注射用左卡尼汀的含量测定方法，能够准确的检测。
1.儀器与试药
1.1仪器
Agilent-1200型高效液相色谱仪. 紫外检测器； XS105DU电子天平：梅特勒公司
1.2试药
试剂：磷酸（分析纯）：哈尔滨化工化学试剂厂；甲醇（色谱纯）：SK Chemicals Ulsan
庚烷磺酸钠（色谱纯）：山东禹王实业有限公司化工分公司；水：注射用水。
对照品：来源：中国食品药品检定研究院，批号：101041-201503，纯度99.9%。
2.方法与结果
2.1色谱条件系统适用性
色谱柱：1、Agela XBP-C18，5μm， 4.6×250mm。流动相：0.05mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸11.5ml，加1mol/L氢氧化钠溶液100ml，加水稀释至2000ml，用磷酸或1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值至2.4）-甲醇-庚烷磺酸钠（82ml：18ml：0.4g）。检测波长：225nm；流速：1.0ml/min；进样量：20μl；柱温：室温
2.2测定法
精密称取本品适量，加水稀释制成加水溶解并制成每1ml中含左卡尼汀4mg的溶液，摇匀。精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取左卡尼汀对照品适量，加水溶解并制成每1ml中含左卡尼汀4mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算供试品中左卡尼汀的含量[2]。
3.方法学验证
3.1 方法专属性试验
精密称取空白辅料和量取空白溶剂20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。在左卡尼汀主峰位置没有色谱峰出现，说明溶剂和空白辅料对含量测定无干扰。专属性较好。
3.2线性关系试验
精密称取左卡尼汀对照品（含量：99.9%）603.21mg，置50ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取1.0 ml、1.7 ml、3.0 ml、3.3 ml、5.0 ml、6.7ml，分别置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成系列线性溶液。分别吸取上述系列对照品溶液各20μl注入色谱仪，记录色谱图。
结果表明：左卡尼汀溶液浓度在1.19～8.00mg/ml范围内，Y=144.43X+7.2867，r为0.9997，线性关系良好，可满足含量测定的要求[3]。
3.3进样精密度试验
对照溶液配制：取对照品40.05mg，置10ml量瓶中，用流动相溶解并定量稀释至刻度，配成每1ml约含4mg的溶液。取上述对照品溶液，照上述色谱条件，连续进样6次。结果RSD为0.66%：本品含量测定方法精密度好。
3.4中间精密度试验
考察随机变动因素对精密度的影响，在同一实验室，不同日期、由不同分析人员、用不同实验设备测定结果之间的精密度。
取本品（批号：170629），照上述色谱条件，进行试验。计算中间精密度平均值及RSD 结果表明：有不同分析人员，在不同日期不同设备测得的左卡尼汀注射液平均含量为100.9%，RSD为0.22%，该试验符合测定要求。
3.5重复性试验
取本品（批号：170629）6份，分别用流动相稀释制成每1ml约含左卡尼汀4mg的溶液，分别摇匀，作为供试溶液，分别精密吸取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果：RSD为0.43%，本品含量测定的重复性良好。
3.6回收率试验
分别精密称取左卡尼汀原料药（含量：98.96%）32.33mg、40.42mg、48.50mg，置于10ml量瓶中，制成含左卡尼汀分别为标示量的80%、100%、120%的供试品溶液，每个浓度各3份。另精密称取对照品约40mg，置于10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为对照品溶液。分别精密量取供试品溶液、对照品溶液各20μl，照上述色谱条件试验，记录色谱图，按外标法以峰面积计算。由测得量与加入量的比值，即得回收率[4]。
结果表明：平均回收率为100.10%，RSD为0.24%，符合准确度试验要求。
3.7溶液稳定性试验
取本品（批号：170629），照上述色谱条件，室温放置，分别于0、1、2、4、6、8小时进样，试验结果：供试品溶液在8个小时内测定结果的相对标准偏差为0.28%，结果表明供试品溶液在室温放置8小时较稳定。
3.8样品含量测定
精密称取适量，用流动相稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液；另精密称取左卡尼汀对照品适量，用流动相稀释制成每1ml中约含4mg的溶液，作为对照品溶液。分别取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。左尼汀注射液样品3批及被仿制药，依法测定，三批供供试品及被仿制药的含量测定结果分别是：供试品：99.85%、100.22%、99.46%；被仿制药：98.77%。%结果表明：三批供试品及被仿制药含量均不少于90.0% [5]。
4.结论
通过对注射用左卡尼汀的含量测定方法学验证，结果：线性1.19～8.00mg/ml范围内呈良好的线性关系，且重复性、准确度、中间精密度较高，溶液在8小时能稳定。结果表明此方法能准确的测定注射用左卡尼汀的含量，因此该方法可行性较高。建议使用此方法测定注射用左卡尼汀的含量。
参考文献
[1]闵翠娥 陆媛 江少仪 谭胜连 HPLC法测定左卡尼汀注射液含量及有关物质 广东药学院学报 2009， 25（6）.
[2]高立军 王涛 全东琴高效液相色谱法测定左卡尼汀注射液的含量 科学技术与工程2011， 11（30）.
[3]李峰 高效液相色谱法用于左卡尼汀注射液的含量检测 中国基层医药 2010， 17（16）.
[4]袁彩君 朱天新高效液相色谱法测定左卡尼汀注射液的含量及杂质A 中国当代医药 2015， （19）.
[5] 耿银银 许丽晓 方会超 王莉 刘万卉 亲水作用色谱法测定左卡尼汀注射液含量及杂质A 烟台大学学报（自然科学与工程版） 2017， 30（3）.