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【摘要】目的：建立HPLC测定气血双补胶囊中阿魏酸含量的方法。方法：采用十八烷基硅烷键合硅胶色普柱（Durashell C18柱，250mm×46mm，5μm ）；流动相：甲醇-0085%磷酸溶液（36∶[KG-*3/5]64）；检测波长：316nm；流速：10ml/min；柱温：30℃。结果：阿魏酸在00123～02458μg范围内呈现良好的线性关系（r=09999），平均回收率为9965%（RSD=086%，n=6）。结论：本方法的专属性强，准确度高，重现性良好，可用于气血双补胶囊的质量控制。
【关键词】气血双补胶囊；含量测定；阿魏酸；高效液相色谱法
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）09-0009-03
气血双补胶囊为云南省个旧市中医院院内制剂，由当归、黄芪等八味中药制备而成，具有补血养肝、益气安神的功效。当归有活血补血，调经止痛，润肠通便的作用。研究表明当归的主要活性成分为阿魏酸，为含当归制剂质量控制的主要指标。但现行的医院制剂气血双补胶囊执行标准无阿魏酸的含量测定项目，为保证该制剂质量的稳定性，研究采用高效液相色谱法对处方中当归主要活性成分阿魏酸进行研究，并对该方法进行了验证[1]。
1仪器与试药
11仪器Agilent1260型高效液相色谱仪；Sartorius BP211D电子天平；奥豪斯AR224CN电子天平。
12试药阿魏酸对照品（批号：110773-200611，中国药品生物制品检定所）；气血双补胶囊（批号：20140517、20140518、20140622、20140725，云南省个旧市中医院）。甲醇为色谱纯；磷酸为优级纯；水为超纯水。
2方法与结果
21色谱条件[2]色谱柱：Durashell C18（250mm×46mm，5μm）；流动相：甲醇-0085%磷酸溶液（36∶[KG-*3/5]64）；流速：10ml/min；柱温：30℃；检测波长：316nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。
22对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加70%甲醇制成每1ml含阿魏酸12μg的溶液，即得。
23供试品溶液的制备[2]取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约03g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，摇匀，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
24阴性样品溶液的制备按照处方工艺制备不含当归的样品溶液，然后按“23”项供试品溶液的制备方法进行处理，即得阴性样品溶液。
25专属性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，结果供试品色谱图中呈现与对照品保留时间一致的色谱峰，阴性样品在与阿魏酸对照品相同的保留时间处未显色谱峰，可见其他原辅料对主成分无干扰。见图1-3。
26线性关系考察分别精密吸取“22”中对照品溶液（每1ml含阿魏酸1229μg）1、2、4、8、10、12、16、20μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，并计算线性回归及相关系数。结果表明：阿魏酸在00123～02458μg 范围内与峰面积线性关系良好，其回归方程为：Y=395398X-00478（r=09999）。
27稳定性试验取同一气血双补胶囊供试品溶液，按上述色谱条件分别在0、1、2、4、8、16、24h时进样测定，测得阿魏酸峰面积积分值分别为23703133、23570355、23098601、23142957、23351109、23460004、23393927，RSD为093%，表明供试品溶液在24h内稳定。
28精密度试验精密吸取对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次，测得阿魏酸峰面积积分值分别为：39538632、39472717、39455893、39455948、39534073、39539258，RSD为011%，结果表明仪器精密度良好。
29重复性试验取同一批号（批号20140725）样品，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定，阿魏酸的平均含量为04755mg/g，RSD为061%，结果表明重复性良好。
210[JP+2]回收率试验精密称取6份供试品（批号：20140725，阿魏酸含量为04755mg/g），每份约015g，按1∶1比例加入阿魏酸对照品，即加入阿魏酸对照品溶液（阿魏酸浓度01229mg/ml）059ml，挥去溶剂。然后按供试品溶液处理方法同法处理，将处理好的供试品溶液按含量测定方法同法测定，计算回收率，阿魏酸的平均回收率为9970%，RSD为079%。结果见表2。
211样品含量测定取4批气血双补胶囊样品，按供试品溶液的制备方法操作，按“21”项下色谱条件测定阿魏酸的含量，结果见表3。
3讨论
阿魏酸是一种广泛存在于植物中的酚酸，药理研究发现阿魏酸具有抗血小板聚集，抑制血小板5-羟色胺释放，
抑制血小板血栓素A2（TXA2）的生成，增强前列腺素活性，镇痛，缓解血管痉挛等药理活性，且毒性较低[3]。阿魏酸在阿魏、当归、川芎、升麻、酸枣仁等中药材中的含量较高 ，是这些中药的有效成分之一，已经作为中成药的质量控制指标之一。研究结果表明，采用HPLC法测定气血双补胶囊中阿魏酸的含量，专属性强，峰形好，且与杂质峰基线分离，效果较为理想。此外，实验参照2015年版《中国药典》一部中当归含量测定项下的提取方法，用70%甲醇加热回流30min提取，当归中阿魏酸较为完全。综上所述，本法专属性强，操作方便，准确度高，重现性良好，可以用于医院制剂气血双补胶囊的质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：374-377.
[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：133-134.
[3] 胡益勇，徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展[J].中成药，2006，28（2）：253-255.
（收稿日期：20160319）
【关键词】气血双补胶囊；含量测定；阿魏酸；高效液相色谱法
【中图分类号】R2841【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）09-0009-03
气血双补胶囊为云南省个旧市中医院院内制剂，由当归、黄芪等八味中药制备而成，具有补血养肝、益气安神的功效。当归有活血补血，调经止痛，润肠通便的作用。研究表明当归的主要活性成分为阿魏酸，为含当归制剂质量控制的主要指标。但现行的医院制剂气血双补胶囊执行标准无阿魏酸的含量测定项目，为保证该制剂质量的稳定性，研究采用高效液相色谱法对处方中当归主要活性成分阿魏酸进行研究，并对该方法进行了验证[1]。
1仪器与试药
11仪器Agilent1260型高效液相色谱仪；Sartorius BP211D电子天平；奥豪斯AR224CN电子天平。
12试药阿魏酸对照品（批号：110773-200611，中国药品生物制品检定所）；气血双补胶囊（批号：20140517、20140518、20140622、20140725，云南省个旧市中医院）。甲醇为色谱纯；磷酸为优级纯；水为超纯水。
2方法与结果
21色谱条件[2]色谱柱：Durashell C18（250mm×46mm，5μm）；流动相：甲醇-0085%磷酸溶液（36∶[KG-*3/5]64）；流速：10ml/min；柱温：30℃；检测波长：316nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于3000。
22对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色瓶中，加70%甲醇制成每1ml含阿魏酸12μg的溶液，即得。
23供试品溶液的制备[2]取装量差异项下的本品内容物，混匀，取约03g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，摇匀，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
24阴性样品溶液的制备按照处方工艺制备不含当归的样品溶液，然后按“23”项供试品溶液的制备方法进行处理，即得阴性样品溶液。
25专属性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，结果供试品色谱图中呈现与对照品保留时间一致的色谱峰，阴性样品在与阿魏酸对照品相同的保留时间处未显色谱峰，可见其他原辅料对主成分无干扰。见图1-3。
26线性关系考察分别精密吸取“22”中对照品溶液（每1ml含阿魏酸1229μg）1、2、4、8、10、12、16、20μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积，以峰面积为纵坐标，对照品进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，并计算线性回归及相关系数。结果表明：阿魏酸在00123～02458μg 范围内与峰面积线性关系良好，其回归方程为：Y=395398X-00478（r=09999）。
27稳定性试验取同一气血双补胶囊供试品溶液，按上述色谱条件分别在0、1、2、4、8、16、24h时进样测定，测得阿魏酸峰面积积分值分别为23703133、23570355、23098601、23142957、23351109、23460004、23393927，RSD为093%，表明供试品溶液在24h内稳定。
28精密度试验精密吸取对照品溶液，按上述色谱条件，连续测定6次，测得阿魏酸峰面积积分值分别为：39538632、39472717、39455893、39455948、39534073、39539258，RSD为011%，结果表明仪器精密度良好。
29重复性试验取同一批号（批号20140725）样品，按供试品溶液制备项下操作，平行制备6份，按上述色谱条件测定，阿魏酸的平均含量为04755mg/g，RSD为061%，结果表明重复性良好。
210[JP+2]回收率试验精密称取6份供试品（批号：20140725，阿魏酸含量为04755mg/g），每份约015g，按1∶1比例加入阿魏酸对照品，即加入阿魏酸对照品溶液（阿魏酸浓度01229mg/ml）059ml，挥去溶剂。然后按供试品溶液处理方法同法处理，将处理好的供试品溶液按含量测定方法同法测定，计算回收率，阿魏酸的平均回收率为9970%，RSD为079%。结果见表2。
211样品含量测定取4批气血双补胶囊样品，按供试品溶液的制备方法操作，按“21”项下色谱条件测定阿魏酸的含量，结果见表3。
3讨论
阿魏酸是一种广泛存在于植物中的酚酸，药理研究发现阿魏酸具有抗血小板聚集，抑制血小板5-羟色胺释放，
抑制血小板血栓素A2（TXA2）的生成，增强前列腺素活性，镇痛，缓解血管痉挛等药理活性，且毒性较低[3]。阿魏酸在阿魏、当归、川芎、升麻、酸枣仁等中药材中的含量较高 ，是这些中药的有效成分之一，已经作为中成药的质量控制指标之一。研究结果表明，采用HPLC法测定气血双补胶囊中阿魏酸的含量，专属性强，峰形好，且与杂质峰基线分离，效果较为理想。此外，实验参照2015年版《中国药典》一部中当归含量测定项下的提取方法，用70%甲醇加热回流30min提取，当归中阿魏酸较为完全。综上所述，本法专属性强，操作方便，准确度高，重现性良好，可以用于医院制剂气血双补胶囊的质量控制。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（四部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：374-377.
[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：133-134.
[3] 胡益勇，徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展[J].中成药，2006，28（2）：253-255.
（收稿日期：20160319）