探讨表皮生长因子受体底物蛋白8(Eps8)在血管生成素1(Ang1)增强大鼠血-脊髓屏障功能过程中发挥的重要作用。
方法分离、培养大鼠脊髓微血管内皮细胞(SCMEC)，建立体外血-脊髓屏障模型。(1)SCMEC给予Ang1处理后于不同时间点(0 h、4 h、8 h、12 h)测定跨内皮电阻(TEER)值，Western blotting检测Eps8蛋白的表达水平，以未用Ang1处理者为对照。(2)将SCMEC分为对照siRNA组、对照siRNA+Ang1组、Eps8 siRNA组及Eps8 siRNA+Ang1组，分别给予siRNA干扰Eps8表达及Ang1处理。Western blotting检测Eps8蛋白的表达水平并测定TEER值，荧光分光光度计测定荧光素钠(Na-F)、伊凡斯兰(EBA)的通透率，纤维型肌动蛋白(F-actin)荧光染色观察细胞骨架变化。
结果(1)Ang1处理后4 h、8 h、12 h SCMEC的TEER值和Eps8蛋白的表达水平较对照组有显著升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)Eps8 siRNA组SCMEC Eps8的表达水平较对照siRNA组降低约75%，差异具有统计学意义(P<0.05)；而Eps8 siRNA+Ang1组较Eps8 siRNA组Eps8的表达水平无明显改变。Eps8 siRNA组不同时间点TEER值较对照siRNA组显著降低，对Na-F及EBA的通透率较对照siRNA组均有明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；而Eps8 siRNA+Ang1组与Eps8 siRNA组相比，TEER值及对Na-F和EBA的通透率无明显改变。对照siRNA+Ang1组SCMEC经Ang1处理4 h后，F-actin在细胞-细胞连接处的分布明显增强，而Eps8 siRNA+Ang1组则无此改变。
结论Ang1可通过影响Eps8在SCMEC的表达调节F-actin在血-脊髓屏障的分布，进而影响大鼠血-脊髓屏障功能。