【摘 要】
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为建立一种经济、可靠的猪瘟病毒（CSFV）血清抗体检测方法,采用间接ELISA（E0-ELISA）方法,以在大肠杆菌（Escherichia coli）中表达的重组蛋白E0为包被原,优化反应条件。结果显示,优化
【机 构】
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新乡学院生命科学技术学院; 郑州大学生命科学技术学院;
【基金项目】
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河南省科技攻关项目(192102110066);河南省高等学校重点科研项目(19A230009);新乡学院博士科研启动经费项目(1366020120)
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为建立一种经济、可靠的猪瘟病毒（CSFV）血清抗体检测方法,采用间接ELISA（E0-ELISA）方法,以在大肠杆菌（Escherichia coli）中表达的重组蛋白E0为包被原,优化反应条件。结果显示,优化后的E0-ELISA在包被原1.0μg/mL质量浓度下37℃包被1 h效果最佳,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉溶液37℃作用2 h,待检血清以1∶100稀释后37℃作用60 min效果最佳,二抗以1∶5 000稀释后37℃孵育45 min效果最佳。当OD450<0.370时,判断为猪血清CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为1.99%～7.69%和2.16%～9.23%,表明该方法具有良好的稳定性;E0-ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒（PCV）、猪细小病毒（PPV）阳性血清时结果均为阴性;当CSFV阳性血清稀释至1∶640时结果仍为阳性,表明该检测方法具有良好的敏感性;与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E0-ELISA检测符合率为92.00%,敏感性为97.86%,特异性为78.33%。综上,成功建立一种经济、稳定、特异性好和敏感性高的CSFV血清抗体间接ELISA检测方法。
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