体外条件下模拟缺氧环境，探讨P311和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)相互作用及对小鼠表皮干细胞(ESC)迁移影响。
方法取15只C57BL/6J野生型新生小鼠，5只同属来源P311基因敲除新生小鼠，分离培养2种小鼠ESC，取第1代细胞行形态学观察，采用流式细胞仪检测细胞表面标志物CD71、CD49f表达后行以下实验。(1)取2种小鼠ESC划痕处理后，立即按随机数字表法(下同)将P311基因敲除小鼠ESC分为常氧组(将细胞加入完全培养基置于常氧二氧化碳培养箱培养，常氧处理下同)和缺氧组(将细胞置于含体积分数1%氧气的缺氧二氧化碳培养箱培养，缺氧处理下同)，每组12个插件；将野生型小鼠ESC分为常氧组、单纯缺氧组、二甲基亚砜(DMSO)对照组(用2 μL DMSO溶剂常氧处理1 h后行缺氧培养)、HIF-1α抑制剂组(加入11 μmol/L HIF-1抑制剂2 μL常氧培养1 h后行缺氧培养)、HIF-1α稳定剂组(加入2 μmol/L FG-4592 2 μL常氧处理1 h后行缺氧培养)，每组12个插件。每组各时相点取3个插件分别于划痕后0(即刻)、12 、24、48 h在100倍倒置相差显微镜下测量划痕剩余宽度。(2)取野生型小鼠ESC行缺氧培养，蛋白质印迹法检测缺氧0(即刻)、12、24、48 h HIF-1α蛋白表达。(3)取野生型小鼠ESC同实验(1)分为单纯缺氧组、DMSO对照组、HIF-1α抑制剂组、HIF-1α稳定剂组并行相应处理，分别在缺氧0、12、24、48 h采用实时荧光定量RT-PCR法检测P311 mRNA表达，免疫细胞化学染色法观测P311表达(样本数均为12)。(4)取第2代人胚胎肾293(HEK-293)细胞分为空载缺氧组(转染空载质粒后进行缺氧培养)、P311常氧组(转染P311报告基因质粒后进行常氧培养)、P311缺氧组(转染P311报告基因质粒后进行缺氧培养)、P311缺氧＋HIF-1α抑制剂组(HIF-1抑制剂处理后转染P311报告基因质粒然后进行缺氧培养)，分别于培养0、12 h检测荧光素酶活性，采用生物信息学方法预测HIF-1α对P311转录调节的结合位点并查找P311启动子序列。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验以及Bonferroni校正。
结果(1)ESC结果。细胞呈现铺路石样改变，细胞由于增殖潜能不同而呈现不同克隆状态。CD71－CD49f＋细胞占85%左右，说明ESC的干性较强、纯度较高。与P311基因敲除小鼠常氧组比较，单纯缺氧组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小(P值均小于0.05)，缺氧组、野生型小鼠常氧组、DMSO对照组、HIF-1α抑制组、HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较小(P值均小于0.05)。与野生型小鼠常氧组比较，缺氧组、单纯缺氧组、DMSO对照组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小(P值均小于0.05)，HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较小(P<0.05)。与单纯缺氧组比较，缺氧组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较大(P值均小于0.05)，HIF-1α抑制剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较大(P<0.05)，HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小(P值均小于0.05)。7组小鼠细胞间划痕后48 h划痕剩余宽度总体比较差异不明显(F＝19.02，P>0.05)。野生型小鼠ESC缺氧0、12、24、48 h的HIF-1α蛋白表达量分别为1.02±0.05、2.56±0.09、1.60±0.17、1.17±0.03。与缺氧0 h比较，HIF-1α蛋白表达量缺氧12 h明显增加(P<0.01)，缺氧24 h开始下降但仍高于缺氧0 h(P<0.05)，缺氧48 h后降至常氧水平(P>0.05)。与单纯缺氧组比较，HIF-1α抑制剂组细胞缺氧各时相点P311 mRNA表达量均明显下降(P值均小于0.05)，HIF-1α稳定剂组细胞P311 mRNA表达量则在缺氧12、24 h明显升高(P值均小于0.05)。与HIF-1α抑制剂组比较，DMSO对照组和HIF-1α稳定剂组细胞在缺氧0、12、24 h P311 mRNA表达量均明显升高(P值均小于0.05)。与单纯缺氧组比较，HIF-1α抑制剂组细胞缺氧各时相点P311表达量均明显下降(P值均小于0.05)，而HIF-1α稳定剂组细胞P311表达量则在缺氧12、24 h明显升高(P值均小于0.05)。与HIF-1α抑制剂组比较，DMSO对照组和HIF-1α稳定剂组细胞P311表达量在缺氧12、24 h明显升高(P值均小于0.05)。(2)HEK-293细胞结果。培养0 h，空载缺氧组、P311常氧组、P311缺氧组、P311缺氧＋HIF-1α抑制剂组细胞荧光素酶活性差异无统计学意义(F＝13.33，P>0.05)。培养12 h，P311缺氧组细胞荧光素酶活性较空载缺氧组高(P<0.01)；P311缺氧组细胞荧光素酶活性较P311常氧组高(P<0.05)；P311缺氧＋HIF-1α抑制剂组细胞荧光素酶活性较P311缺氧组低(P<0.01)。
结论缺氧早期，HIF-1α可能通过诱导P311表达促进小鼠ESC迁移。