【摘 要】
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目的 建立并验证组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)基因修饰间充质干细胞(MSCs)治疗阿尔兹海默症(AD)有效性的实验动物模型.方法 1)TIMP2基因修饰MSCs的获得:利用腺相关病毒(AA
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院输血研究所,四川成都610052上海科技大学;康景生物科技有限公司;四川大学基础医学院;
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目的 建立并验证组织金属蛋白酶抑制因子2(TIMP2)基因修饰间充质干细胞(MSCs)治疗阿尔兹海默症(AD)有效性的实验动物模型.方法 1)TIMP2基因修饰MSCs的获得:利用腺相关病毒(AAV)基因表达载体和人脐带来源的MSCs(hUB-MSCs)构建TIMP2基因修饰的MSCs(命名为hUB-MSCs-T),采用ELISA检测hUB-MSCs-T分泌TIMP2蛋白含量,通过流式检测hUB-MSCs-T表面分子,以及通过脂肪、成骨、软骨细胞分化试验鉴定对hUB-MSCs-T的分化能力.2)hUB-MSCs-T对AD实验小鼠的影响:将30只7月龄雄性AD小鼠随机均分为3组,PBS组:小鼠尾静脉注射0.006 7 mol/L PBS缓冲液0.2 mL/只;hUB-MSCs组:注射1×106个/mL悬浮hUB-MSCs0.2 mL/只;hUB-MSCs-T组:注射1×106个/mL悬浮hUB-MSCs-T0.2 mL/只;均为1次/周,连续8周.治疗后第1-4周,采用旷场试验、新物体识别试验和巴恩斯迷宫试验评价小鼠的记忆和认知能力;治疗后第5周解剖小鼠3只/组,取海马区域组织做测序分析.结果 hUB-MSCs-T、hUB-MSCs和PBS 3组AD小鼠在巴恩斯迷宫试验d1第1次训练的逃避潜伏期(s)分别为76±93 vs 148±83 vs 150±89 (P＜0.05),第4次训练的逃避潜伏期(s)分别为52±46 vs 87±87 vs 96±78(P＜0.05);在巴恩斯迷宫试验d12的长时记忆试验中,进入目标洞次数分别为17±9.6 vs 12.0±5.3 vs 10.0±7.7(P＜0.05).结论 hUB-MSCs-T在一定程度上改善了AD小鼠的记忆和认知能力.
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