【摘 要】
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目的：构建稳定表达成熟miRNA-140腺病毒表达载体。方法：从人类基因组中扩增出带有酶切位点的miRNA-140目的基因,将目的基因连接到穿梭质粒p DC316-m CMV-EGFP,进一步将带有目的
【机 构】
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南方医科大学附属深圳恒生医院口腔科,深圳市第二人民医院（深圳大学第一附属医院）
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目的：构建稳定表达成熟miRNA-140腺病毒表达载体。方法：从人类基因组中扩增出带有酶切位点的miRNA-140目的基因,将目的基因连接到穿梭质粒p DC316-m CMV-EGFP,进一步将带有目的基因的穿梭质粒重组到骨架质粒Ad Easy,并将重组质粒转染到AAV-293细胞中包装成腺病毒载体,经过二次扩增之后获得高滴度的腺病毒,并且检测其包装效率及感染滴度。最后,用目的腺病毒感染骨肉瘤细胞,通过荧光定量PCR方法检测miRNA-140表达情况。结果：酶切鉴定和测序结果均表明,miRNA-140成功
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