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[摘 要] 海原县作为宁夏区内马铃薯生产大县,每年繁育马铃薯原原种2000万粒以上,这主要是经过多年的马铃薯试管苗切段快繁技术试验,成功培养了更多的脱毒马铃薯种苗,从而使脱毒马铃薯种薯源源不断地应用于生产当中。
[关键词] 马铃薯;种苗;扩繁技术
马铃薯脱毒试管苗的工厂化生产快繁,由于其技术和设备条件均要求很高,脱毒试管苗的切段快繁技术的好坏,直接关系到马铃薯种苗脱毒的成功与否,所以把握好每一个环节的技术要点非常关键。
一、洗瓶
扩繁的苗瓶可用三角瓶或小灌头瓶,按需要量准备充足。用清洁热水加入适量的洗衣粉,用试管刷涮洗苗瓶,达到瓶壁水珠分布非常均匀,透明感强,然后倒置在网架上凉干水珠待用。
二、配制培养基
1.称药品
根据培养基配方的用量,用托盘天平称琼脂(按每升蒸馏水加7g琼脂)、蔗糖(按每升蒸馏水加20-30g蔗糖);用电光分析天平按下列配方(MS配方)称出药品,并编号。
2.配母液
将称量的药品分类按排号溶在器皿的蒸馏水中,蒸馏水能充分溶解药品为宜,药品加入的顺序为:大量元素以先单价后双价加入,最后加入钙盐,即配成母液。
3.制作培养基
(1)首先用量筒量出所需的蒸馏水,用大铝锅盛装,将称得的琼脂侵在大铝锅的蒸馏水中,然后将大铝锅边加热边搅动使琼脂充分溶解后再加入蔗糖使其溶解。
(2)在充分溶解的琼脂和蔗糖溶液中分别加入母液1、母液2、母液3、母液4,母液5用小火继续加热使其充分溶解,再用沸蒸馏水定容。
(3)调节配养基pH值。用pH试纸检验,显酸性时,用滴管滴加NaOH;或KOH显碱性时滴加磷酸或盐酸溶液,直至pH试纸测得pH值为5.7为宜,即培养基已配制完备。
三、装瓶
将配制好的培养基分别装在洗净的苗瓶中,每瓶定容15-20mL,然后用封口膜封口,将其送到消毒室待消毒。
四、高压消毒
用高压灭菌锅进行灭菌消毒。在120-124℃下,消毒25min,即消毒结束,停止加热后约过20-30min取出苗瓶。
五、无菌操作室内消毒灭菌
1.熏蒸
无菌室刚开始工作或间隔2-3个月未进行消毒时,先熏蒸消毒。熏蒸按每立方米空间计算,即1m3空间按10:7的高锰酸钾溶液放盆中,马上关闭门窗,间隔1-2d后即可在室内工作。
2.紫外线消毒
将工作服、口罩、拖鞋、盛装75%的酒精瓶、剪刀、镊子、酒精灯、苗源瓶、扩繁瓶、封口膜、线绳或皮筋、干净纱布等无菌室所需物品放在无菌室固定位置,启动超净工作台,通风杀菌,室内紫外灯打开消毒,工作人员快速离开无菌室,灭菌25-30min即可。
六、试管苗切段扩繁
工作人员按无菌操作程序进入无菌室,穿戴好消毒服装,用75%的酒精将双手消毒,再用酒精侵湿干净的纱布擦拭超净工作台面、苗源瓶、扩繁瓶、将剪刀、镊子插入酒精瓶,就可进行切断接苗。方法是:关闭超净工作台杀菌开关,点亮酒精灯,取掉扩繁瓶的封口膜,瓶口稍斜,离酒精灯芯0.5cm用手轻轻转动,直至瓶底以上部全部消毒一遍,然后放在超净工作台的右边,再取掉苗源瓶的封口膜用同样的方法在酒精灯上消毒一遍,防止小苗被烧伤,然后放在超净工作台左边;最后把剪刀和镊子从盛75%的酒精瓶内取出,放在酒精灯离灯芯0.5cm处上下转动消毒一遍,稍凉片刻,用镊子将苗源瓶中的小苗夹出瓶口,只留根部在瓶内,用剪刀剪掉根部,然后再用镊子夹小苗离扩繁瓶口1-2cm處(注意不要让小苗挨上扩繁瓶口,以防感染),剪带一片小叶的茎段放在扩繁瓶中,一般扩繁瓶可接15-20个茎段。封口膜在酒精灯上稍消毒后封口,然后在瓶外壁注明接苗品种、年月日、切苗人员姓名。
七、培养
把切断接好苗的扩繁瓶送到培养室进行培养,培养室温度控制在25℃,光照2000—3000勒克斯,如用日光灯为光源,每天光照16h为宜;相对湿度保持在75-80%之间,切段扩繁后3-4d如果发现有污染瓶,须马上将污染瓶移离培养室。健康苗50-60d就可以再扩繁或作扦插的基础苗。
[关键词] 马铃薯;种苗;扩繁技术
马铃薯脱毒试管苗的工厂化生产快繁,由于其技术和设备条件均要求很高,脱毒试管苗的切段快繁技术的好坏,直接关系到马铃薯种苗脱毒的成功与否,所以把握好每一个环节的技术要点非常关键。
一、洗瓶
扩繁的苗瓶可用三角瓶或小灌头瓶,按需要量准备充足。用清洁热水加入适量的洗衣粉,用试管刷涮洗苗瓶,达到瓶壁水珠分布非常均匀,透明感强,然后倒置在网架上凉干水珠待用。
二、配制培养基
1.称药品
根据培养基配方的用量,用托盘天平称琼脂(按每升蒸馏水加7g琼脂)、蔗糖(按每升蒸馏水加20-30g蔗糖);用电光分析天平按下列配方(MS配方)称出药品,并编号。
2.配母液
将称量的药品分类按排号溶在器皿的蒸馏水中,蒸馏水能充分溶解药品为宜,药品加入的顺序为:大量元素以先单价后双价加入,最后加入钙盐,即配成母液。
3.制作培养基
(1)首先用量筒量出所需的蒸馏水,用大铝锅盛装,将称得的琼脂侵在大铝锅的蒸馏水中,然后将大铝锅边加热边搅动使琼脂充分溶解后再加入蔗糖使其溶解。
(2)在充分溶解的琼脂和蔗糖溶液中分别加入母液1、母液2、母液3、母液4,母液5用小火继续加热使其充分溶解,再用沸蒸馏水定容。
(3)调节配养基pH值。用pH试纸检验,显酸性时,用滴管滴加NaOH;或KOH显碱性时滴加磷酸或盐酸溶液,直至pH试纸测得pH值为5.7为宜,即培养基已配制完备。
三、装瓶
将配制好的培养基分别装在洗净的苗瓶中,每瓶定容15-20mL,然后用封口膜封口,将其送到消毒室待消毒。
四、高压消毒
用高压灭菌锅进行灭菌消毒。在120-124℃下,消毒25min,即消毒结束,停止加热后约过20-30min取出苗瓶。
五、无菌操作室内消毒灭菌
1.熏蒸
无菌室刚开始工作或间隔2-3个月未进行消毒时,先熏蒸消毒。熏蒸按每立方米空间计算,即1m3空间按10:7的高锰酸钾溶液放盆中,马上关闭门窗,间隔1-2d后即可在室内工作。
2.紫外线消毒
将工作服、口罩、拖鞋、盛装75%的酒精瓶、剪刀、镊子、酒精灯、苗源瓶、扩繁瓶、封口膜、线绳或皮筋、干净纱布等无菌室所需物品放在无菌室固定位置,启动超净工作台,通风杀菌,室内紫外灯打开消毒,工作人员快速离开无菌室,灭菌25-30min即可。
六、试管苗切段扩繁
工作人员按无菌操作程序进入无菌室,穿戴好消毒服装,用75%的酒精将双手消毒,再用酒精侵湿干净的纱布擦拭超净工作台面、苗源瓶、扩繁瓶、将剪刀、镊子插入酒精瓶,就可进行切断接苗。方法是:关闭超净工作台杀菌开关,点亮酒精灯,取掉扩繁瓶的封口膜,瓶口稍斜,离酒精灯芯0.5cm用手轻轻转动,直至瓶底以上部全部消毒一遍,然后放在超净工作台的右边,再取掉苗源瓶的封口膜用同样的方法在酒精灯上消毒一遍,防止小苗被烧伤,然后放在超净工作台左边;最后把剪刀和镊子从盛75%的酒精瓶内取出,放在酒精灯离灯芯0.5cm处上下转动消毒一遍,稍凉片刻,用镊子将苗源瓶中的小苗夹出瓶口,只留根部在瓶内,用剪刀剪掉根部,然后再用镊子夹小苗离扩繁瓶口1-2cm處(注意不要让小苗挨上扩繁瓶口,以防感染),剪带一片小叶的茎段放在扩繁瓶中,一般扩繁瓶可接15-20个茎段。封口膜在酒精灯上稍消毒后封口,然后在瓶外壁注明接苗品种、年月日、切苗人员姓名。
七、培养
把切断接好苗的扩繁瓶送到培养室进行培养,培养室温度控制在25℃,光照2000—3000勒克斯,如用日光灯为光源,每天光照16h为宜;相对湿度保持在75-80%之间,切段扩繁后3-4d如果发现有污染瓶,须马上将污染瓶移离培养室。健康苗50-60d就可以再扩繁或作扦插的基础苗。