【摘 要】
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目的 观察整合素连接激酶(ILK)在转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号通路中的作用,探讨ILK对瘢痕成纤维细胞分化影响的作用机制.方法 体外分离培养瘢痕成纤维细胞后,实验分为4组:对照组、ILK小分子干扰RNA(siRNA)组、TGF-β1组、ILK siRNA+TGF-β1组.采用荧光标记的免疫细胞化学法检测各组成纤维细胞中ILK的表达变化,应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-P
【机 构】
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目的 观察整合素连接激酶(ILK)在转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号通路中的作用,探讨ILK对瘢痕成纤维细胞分化影响的作用机制.方法 体外分离培养瘢痕成纤维细胞后,实验分为4组:对照组、ILK小分子干扰RNA(siRNA)组、TGF-β1组、ILK siRNA+TGF-β1组.采用荧光标记的免疫细胞化学法检测各组成纤维细胞中ILK的表达变化,应用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测各组成纤维细胞中ILK mRNA、Smad3 mRNA及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) mRNA的表达.结果 免疫荧光图像显示,经siRNA沉默后,成纤维细胞的ILK表达水平下调;经TGF-β1(5μg/L)刺激后,ILK表达水平明显上调.FQ-PCR检测结果显示:经ILK siRNA转染后,成纤维细胞的ILK mRNA(0.522±0.113)、Smad3 mRNA (0.222±0.089)及α-SMA mRNA(0.118±0.080)表达水平同时下降;应用TGF-β1刺激后,成纤维细胞的ILK mRNA (2.233±0.511)、Smad3 mRNA(2.891±0.475)及α-SMA mRNA(2.581 ±0.826)表达水平重新上升,与对照组及ILK siRNA组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在瘢痕成纤维细胞中,Smad3及α-SMA的mRNA水平可以被ILK上调,而TGF-β1又可以诱导ILK的表达,ILK可能参与Smad蛋白的调控,对TGF-β1/Smad3信号通路诱导的促成纤维细胞分化作用产生影响。
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