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通过简单可靠的方法提升目标产物产量是代谢工程的一大目的,但代谢流量的不均衡利用与酶活性不足往往会限制生物合成的效率.目前已有许多关于单个酶的优化研究,本研究展示了一种可以平衡代谢流量的新型组合优化方法,该方法基于Gibson组装(GA)与双顺反子设计(BCD)标准起始元件.以MEP通路为例,通过选取2个限速酶编码基因:dxs和idi,与5个绝缘BCD起始元件,在有限步骤内产生了一个组合优化库,再以β-胡萝卜素为指示物进行筛选,使产量提升至10倍以上.研究结果证实了该组合优化方法的有效性与代谢通路优化工程的巨大潜力,同时提示这种优化方法适用于一系列次级代谢通路.