【摘 要】
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采用碳二亚胺法制备酶标农药(过氧化氢酶标记甲胺磷),以酶标农药对鸡肝酯酶的抑制率和抑制后酶标农药-酯酶复合物中标记酶酶活为指标,对制备酶标甲胺磷交联反应的pH和所用缓
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(31101283);上海市科技兴农重点攻关项目(沪农科攻字(2015)第2-4号);上海市高校青年教师培养计划项目(slg11021)
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采用碳二亚胺法制备酶标农药(过氧化氢酶标记甲胺磷),以酶标农药对鸡肝酯酶的抑制率和抑制后酶标农药-酯酶复合物中标记酶酶活为指标,对制备酶标甲胺磷交联反应的pH和所用缓冲液类型进行优化,并对其偶联率进行了分析。结果发现,pH增加有效促进了甲胺磷和标记酶分子之间的交联,而缓冲体系类型对此交联反应的影响相对较小。然而随之持续上升的偶联率带来的空间位阻效应也逐渐明显。随着pH增加,标记物抑制率和抑制后的标记酶活均呈现先增加后略下降的趋势,且分别在pH为6.0和5.5时达到峰值,其峰值时偶联率分别为24和22。综合考量,采用pH 6.0的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物(MES)缓冲液制备的酶标农药,其抑制率和标记酶活均达到较优值,分别为45.29%和47.67U,此时其偶联率约为24。
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