【摘 要】
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利用PCR技术克隆了人类-αactin基因的启动子(约450bp),尝试用去掉启动子的pEGFP-N1作为框架结构,成功构建了真核表达载体pEGFP-N1--αactin-P。应用Lipofectamine 2000将所
【机 构】
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西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术中心
【基金项目】
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国家“863”（2002AA216161）,国家自然科学基金（30200137）
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利用PCR技术克隆了人类-αactin基因的启动子(约450bp),尝试用去掉启动子的pEGFP-N1作为框架结构,成功构建了真核表达载体pEGFP-N1--αactin-P。应用Lipofectamine 2000将所构建的pEGFP-N1--αactin-P转染入小鼠ES细胞。通过比较,发现在本实验室条件下,质粒DNA浓度以3.0~5.0μg/mL,转染时间约在2~3 h最佳。200μg/mL的G418较适宜于靶细胞的转染与筛选。得到表达心肌-αactin和GFP的小鼠ES细胞,基本维持小鼠ES细胞的形态。PCNA染色结果表明,转染后的小鼠ES细胞具有增殖能力。-αactin抗体免疫组化染色结果表明,转染后细胞表达-αactin和GFP,揭示构建的真核表达载体pEGFP-N1--αactin-P转染小鼠ES细胞,可能促进其向心肌细胞分化并对其筛选。
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