目的 观察青光眼滤过手术后滤过泡瘢痕内成纤维细胞中反义寡核苷酸(ASODN)对结缔组织生长因子(CTGF)的调节,为抗青光眼术后滤过泡区瘢痕形成提出新的解决思路.方法 取兔眼小梁切除术后第5天的手术区结膜及板层巩膜行成纤维细胞的原代培养.培养的细胞根据干预方式的不同分为CTGF ASODN-脂质体复合物组、CTGF ASODN对照组、CTGF随机序列寡核苷酸(SCODN)-脂质体复合物组和空白对照组.利用脂质体介导,将经异硫氰酸荧光素(FITC)标记的CTGF ASODN转染至兔抗青光眼滤过手术后滤过泡瘢痕组织成纤维细胞中,利用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CTGF mRNA在成纤维细胞中的表达,采用Western blot法检测CTGF蛋白的合成量,以相对灰度值为指标,观察CTGF ASODN对CTGF在手术区结膜及板层巩膜行成纤维细胞中表达的抑制效果.结果 组织块培养法培养的成纤维细胞在13~14d 达到融合.CTGF ASODN-脂质体复合物组转染6h后可见培养的细胞质中出现少量黄绿色荧光,12h后荧光依然存在;CTGF mRNA在成纤维细胞中表达的相对灰度值明显低于空白对照组(0.457±0.035 vs 0.790±0.037),差异有统计学意义(P<0.01);CTGF蛋白水平表达也呈相同趋势(0.177±0.022 vs 0.557±0.024) (P<0.01).CTGF ASODN对照组、CTGF SCODN-脂质体复合物组CTGF在成纤维细胞中的表达与空白对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05).结论 脂质体能有效地将CTGF ASODN转染进入体外培养的成纤维细胞;CTGF在青光眼滤过手术后的瘢痕形成过程中发挥重要作用;CTGF ASODN 能在脂质体介导下抑制CTGF在成纤维细胞中的表达。
兔青光眼术后成纤维细胞内结缔组织生长因子的调节
【摘 要】
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目的 观察青光眼滤过手术后滤过泡瘢痕内成纤维细胞中反义寡核苷酸(ASODN)对结缔组织生长因子(CTGF)的调节,为抗青光眼术后滤过泡区瘢痕形成提出新的解决思路.方法 取兔眼小梁切除术后第5天的手术区结膜及板层巩膜行成纤维细胞的原代培养.培养的细胞根据干预方式的不同分为CTGF ASODN-脂质体复合物组、CTGF ASODN对照组、CTGF随机序列寡核苷酸(SCODN)-脂质体复合物组和空白对照
【机 构】
:
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【出 处】
:
中华实验眼科杂志
【发表日期】
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2010年28期
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