【摘 要】
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本研究采用均匀设计和单因素试验相结合的方法,探寻淫羊藿ISSR-PCR的各组分(即引物, 2×Taq Master Mix,模板DNA)的最佳用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响,为进一步使用ISS
【机 构】
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湖北省农业科学院中药材研究所湖北省农业科技创新中心中药材研究分中心;
【基金项目】
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湖北省农业科学院青年科学基金项目(2019NKYJJ14);湖北省农业科学院青年科学基金项目(2018NKYJJ16);国家现代农业产业技术体系建设专项(CARS-21);湖北省重大专项(2017ACA175);湖北省技术创新专项(民族专项)(2018AKB-037);湖北省中央引导地方科技发展专项(2018ZYYD046)共同资助
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本研究采用均匀设计和单因素试验相结合的方法,探寻淫羊藿ISSR-PCR的各组分(即引物, 2×Taq Master Mix,模板DNA)的最佳用量及退火温度对ISSR-PCR扩增的影响,为进一步使用ISSR分子标记分析淫羊藿的遗传多样性提供科学依据。结果表明,筛选的最佳体系为:在20μL的体系中,模板DNA的量为30ng,2×Taq Master Mix的量为9.8μL,引物为0.325μmol/L。此外,筛选出7条多态性较好、条带稳定的引物(UBC-808, UBC814, UBC826, UBC827, UBC840, UBC846及UBC856),并对其进行温度梯度PCR,结果表明,所选引物的最佳退火温度介于46.8℃～65℃之间。在此基础上,对13份淫羊藿种质资源进行ISSR扩增验证,结果表明建立的最佳反应体系扩增效果较好,稳定性强,对淫羊藿的遗传多样性分析、鉴定等具有较好的应用价值。
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