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目的
建立外周血单核细胞整合型HIV DNA荧光定量ALu-PCR的检测方法。
方法收集我院就诊的病毒载量<20IU/ml的艾滋病患者、耐药患者和初诊患者各10例。培养ACH2细胞系，每个细胞含有一个HIV基因组。构建pMD19T-CD3质粒，测定浓度，计算其拷贝数。选用针对HIV3′长末端重复序列的引物ULF1，和针对人类基因高度保守的Alu1和Alu2序列的引物，对1∶5梯度稀释，共8个梯度的ACH2基因组及样本进行预扩增。将预扩增的产物用引物Lambda T、UR2及HIV Taqman探针进行整合型HIV DNA的荧光扩增；用引物CD3IN5、CD3IN3及CD3 Taqman探针对预扩增产物及1∶5梯度稀释的CD3质粒进行CD3荧光扩增。
结果以1∶5梯度稀释的CD3质粒为标准品，得到的线性回归方程y＝－2.731x+43.01，(R2＝0.953)，根据一个人类细胞含2个CD3基因，可得到样本及ACH2的细胞数。ACH2的细胞数即HIV拷贝数为4.271×104；以1∶5梯度稀释的ACH2为标准品，回归方程为y＝－3.146x+39.11 (R2＝0.968)计算可得样本整合型HIV DNA；用样本的整合型HIV-1 DNA/样本的CD3的拷贝数，即为单位细胞中整合型HIV拷贝数。通过对不同组间的t检验，各组间无差异(P>0.05)。
结论该方法对于低拷贝HIV病毒量的检测有优势，提示通常的抗病毒治疗无法有效攻击潜伏库中的病毒，同时也为新的干预治疗提供了一种评价依据。