利用CRISPR/CAS9技术构建QKI敲除GC1-spg细胞株及其生物学功能检测

来源 :基础医学与临床 | 被引量 : 0次 | 上传用户：dephibase

【摘要】

：

目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建QKI敲除的GC1-spg细胞株,并在体外研究QKI对GC1-spg细胞增殖和分化的影响。方法利用CRISPR/Cas9系统的PX330质粒构建敲除QKI的重组质粒,

【作者】

：

钟顺顺李凯杨阳缪时英王琳芳宋伟

【机构】

：

中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院医学分子生物学国家重点实验室

【出处】

：

基础医学与临床

【发表日期】

：

2018年5期

【关键词】

：

CRISPR/CAS9 GC1-spg QKI 精子发生

【基金项目】

：

国家重大科学计划(2015CB943001)

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目的利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建QKI敲除的GC1-spg细胞株,并在体外研究QKI对GC1-spg细胞增殖和分化的影响。方法利用CRISPR/Cas9系统的PX330质粒构建敲除QKI的重组质粒,转染GC1-spg野生型细胞,加入嘌呤霉素进行筛选,通过蛋白质免疫印迹（Western blot）和基因测序鉴定出GC1-spg敲除QKI细胞株;常规培养野生型和敲除细胞株,利用细胞计数检测试剂盒（CCK8）绘制增殖曲线和荧光定量PCR（q-PCR）检测减数分裂相关基因变化。结果本研究成功构建出Q

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