【摘 要】
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目的构建Versican基因RNAi慢病毒载体并研究Versican对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用。方法根据人Versican基因序列,构建4个携带RNAi序列的慢病毒载体,利用293T细胞进行慢
【机 构】
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第三军医大学大坪医院野战外科研究所呼吸科,第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科,
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目的构建Versican基因RNAi慢病毒载体并研究Versican对毛乳头细胞聚集性生长的干预作用。方法根据人Versican基因序列,构建4个携带RNAi序列的慢病毒载体,利用293T细胞进行慢病毒包装。实验分为Control组(不做处理)、NC组(用空慢病毒载体包装的病毒转染细胞)和KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒感染组。应用KD1、KD2、KD3、KD4 Versican RNAi慢病毒及NC慢病毒感染H1299细胞,荧光显微镜下观察感染效率,应用Real-time PCR检测Versican的表达,筛选出感染效率和特异性最高的慢病毒载体进行下一步研究。用慢病毒感染毛乳头细胞后,用Real-time PCR检测Versican基因的表达,并用Western blot检测Versican、ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达,应用光镜观察毛乳头的生长情况。结果成功构建4种慢病毒载体,其中KD2慢病毒感染H1299细胞较其他慢病毒、Control和NC组显著下调Versican mRNA的表达(P<0.01)。应用KD2慢病毒感染毛乳头细胞后,较Control和NC组明显下调毛乳头细胞Versican mRNA和蛋白的表达(P<0.01),ADAMTS4、p-c-JUN蛋白的表达较Control组明显下调(P<0.01),毛乳头细胞聚集性生长的特性消失。结论成功构建了Versican基因RNAi慢病毒载体。Versican基因通过c-JUN-ADAMTS-4通路调控毛乳头细胞的聚集性生长。
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