【摘 要】
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目的:构建人IL-8正义和反义真核表达载体。方法:RT-PCR扩增正义和反义IL-8基因片段后,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定后,采用脂质体
【机 构】
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武警医学院免疫学教研室,武警医学院微生物学教研室,
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目的:构建人IL-8正义和反义真核表达载体。方法:RT-PCR扩增正义和反义IL-8基因片段后,将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),通过菌落PCR、双酶切及测序进行鉴定后,采用脂质体法分别瞬时转染至人卵巢癌细胞系A2780和SKOV3细胞中,并用RT-PCR和ELISA法检测细胞转染后IL-8的表达水平。结果:经验证,重组人IL-8正义/反义真核表达载体构建正确。pcDNA3.1(+)-ssIL-8转染A2780细胞后,其IL-8 mRNA及蛋白表达水平均显著增加;而pcDNA3.1(+)-asIL-8转染SKOV3细胞后,其IL-8分泌水平降低。结论:成功构建了人IL-8正义/反义真核表达质粒pcDNA3.1(+)-ssIL-8/pcDNA3.1(+)-asIL-8,为后续研究IL-8在卵巢癌及其他肿瘤中的作用打下基础。
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